Figure 2.
Figure 3. Scale-up in a Mobius® 3L Single-Use Bioreactor：
圖 3.
圖 3.
圖 3.
圖 3.
圖 3.
在 Mobius® 50L 單次使用生物反應器中生產慢病毒
Figure 4. VirusExpress® 293T Lentiviral Production Cells were expanded in Mobius® 50 L Single-Use Bioreactor at N-1 stage for 3 days, and then fresh medium was added volume up to 40L working volume.在使用 PEI 轉染試劑、第三代慢病毒包裝質粒和帶有 GFP 報告基因的轉染質粒進行轉染之前，細胞生長 1 天。 共完成 2 次運行。 實線為細胞生長數據，虛線為細胞存活率（圖 4）。柱狀圖是用 HT1080 細胞獲得的慢病毒感染滴度（圖 5）。
圖 4.
Figure 5.
生物反應器中的細胞生長
圖 7. VirusExpress® 293 AAV 生產細胞在 Mobius® 50 L 單次使用生物反應器中進行批次生長培養。細胞以 6 x 105cells/mL 種植，並在第 3 天以新鮮培養基稀釋。在 Mobius® 50L 生物反應器中，獲得了 8 x 106cells/mL 的峰值存活細胞密度 (VCD)，存活率為 >90%。
不同血清型的生產率
圖8和9。VirusExpress® 293 AAV 生產細胞的生產率，以搖瓶或各種生物反應器平台中多種血清型的 GFP 模型病毒的粗收基因體滴度 (gc/mL) 顯示：
圖8.
Figure 9.
使用替代轉染試劑的生產率
圖 10. VirusExpress® 293 AAV 生產細胞在振盪瓶中使用 PEI 基轉染與使用替代轉染試劑生產的 GFP AAV2 模型病毒的粗收割基因組滴度 (gc/mL)
圖 10.
圖 10.
圖 10.
圖12.EX-CELL®CD昆蟲細胞培養基支援多種昆蟲細胞的生長。Sf-21、Tni、S2 和 C636 细胞在 EX-CELL® CD 昆虫细胞培养基中适应至少三个传代。適應後，細胞在第零天以 0.5x106 cells/mL 種植。存活細胞密度 (VCD) 和存活率隨後追蹤 7 天。
圖 12.
AAV生產的性能評估
圖13.EX-CELL® CD昆蟲細胞培養基是在Sf-RVN®和Sf-9細胞中進行AAV2生產測試的最佳化學定義培養基。細胞在六種不同的細胞培養基中適應了至少五次傳代。其中兩種是化學定義的 (包括 EX-CELL® CD 昆蟲細胞培養基)，另外四種是非化學定義的，含有水解物。以 2x106 cells/mL 種植細胞，以 MOI 0.01 及等比例感染 ITR-GFP 及 AAV2-RepCap baculovirus。在感染後 120 小時（hpi）收穫樣本，並以 ELISA（Capsid / mL）和 ddPCR（Genome / mL）評估 AAV2 的生產力。
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