神經醯胺酶（矽氨酸酶）協議

神經氨酸酶協議

使用神經氨酸酶（產品編號10269611001）從純化的脂寡糖（LOS）中去除鍵氨酸

該酶可用於裂解蛋白質中的鍵氨酸。通常 N-糖苷酶 F、O-糖苷酶和神經氨酸酶的混合物是有用的（O-聚糖通常有苷酸化的結構，可以被神經氨酸酶水解，然後 O-糖苷酶可以繼續水解結構）。酵素/底物的比例應約為 0.04 U/25 - 80 μg。

與 O-葡萄糖苷酶結合

要使用來自 霍亂弧菌的神經氨酸酶V.因此，使用 pH 6 而非 pH 7。2.

以神經氨酸酶處理福馬林固定的細胞

以下程序改編自 Corral, et al., (1990) BBRC 172:1349-1356:

• 用 Dulbecco′s PBS 洗 3x10⁷ cells
• 在 +4 °C 下固定細胞 1 小時，用等量的 1% 多聚甲醛、0.1 M sodium-cacodylate, pH 7.3
• 用 PBS 洗細胞三次，並以 3x10⁷ cells /mL 的濃度重悬於 PBS 中
• 使用 150 μL 此細胞懸浮液，並在 +37 ° C 下用 250 U/mL神經醯胺處理 1 小時。C 與 250 U/mL來自霍亂弧菌的神經氨酸酶處理

Specific inhibitors of neuramindase (silaidase) from Vibrio cholerae：

• 2,3-脫水-2-脫氧-N-乙酰基神經氨酸
• 脫水-脫氧-N-乙酰基神經氨酸系列的更高同系物（酰基 = 丙酰基....）
• 二異丙基-氟磷酸鹽

尚未確定 SDS、胍 HCl 或尿素是否會抑制該酶，但有可能造成失活。

尚未確定 CHAPS、Triton X100/X114、2-巯基乙醇或 Manidet P40 是否會抑制該酶，但很可能不會產生抑制作用。沒有關於 DTT 抑制作用的資訊。

材料

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