用於核酸去磷酸化的小牛腸道 (CIP) 鹼性磷酸酶

(CIP)
來自小牛腸

(EC 3.1.3.1)
Product No. 產品說明
程序：DNA 的去磷酸化
Heat Inactivation
Materials

CIP 常用於去除 DNA、RNA 以及核糖核苷三磷酸中的 5'- 磷酸基團。移除 5'- 磷酸鹽對於防止裂解 DNA 載體的自結非常有用。此特性可大幅降低克隆程序中的背景（不含插入物的質粒）。

Product Summary

活性： 約10,000 單位/毫升（批次特定活性請參閱標籤）
DNase： 無檢出
Nickase： None detected
RNase: None detected
單位定義： 一個單位會水解 1.0 µmole 的 4-硝基苯磷酸酯，pH 值为 9.8，温度为 37 °C（二乙醇胺）。

10X CIP Buffer (C 3225)
1 M NaCl
0.5 M Tris-HCl pH 7.9 at 25 °C
0.1 MgCl₂
0.01 M 二硫蘇糖醇

Storage buffer

10 mM Tris-HCl, pH 8.2
50 mM KCl
1 mM MgCl₂
0.1 mM ZnCl₂
50 % glycerol

Procedure：DNA 的去磷酸化

1. 將 DNA 溶解在 1X CIP 緩衝液中（0.5µg DNA/10 µL）。
2. 對於 5「 overhang DNA，添加 0.1 單位/pmol CIP；對於 3」 overhang 或鈍端 DNA，添加 1 單位/pmol。
3. 在 37 °C 下孵育 60 分鐘。
4. 用酚/氯仿 (P2069)提取或凝膠純化 DNA。*
5. 以酒精沉澱法回收 DNA。
   *註： 苯酚萃取或凝膠純化使熱滅活不必要。

熱失活。熱滅活

在 5 mM EDTA 存在下，加熱至 75 °C 10 分鐘，可滅活 95% 以上的活性。

材料

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參考資料

1. Moessner E, Boll M, Pfleiderer G. 1980. Purification of Human and Bovine Alkaline Phosphatases by Affinity Chromatography. Hoppe-Seyler´s Zeitschrift für physiologische Chemie. 361(1):543-550. https://doi.org/10.1515/bchm2.1980.361.1.543

2. Sambrook, et al. J. 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory.