Duolink In Situ后复染实验方案

我们建议在Duolink In Situ荧光用户手册的第7.3节第5步完成扩增步骤后进行复染操作。以下实验方法以使用直接标记的FITC抗α微管蛋白抗体进行复染为例：

在室温下进行以下步骤。

1. 将扩增-聚合物溶液从玻片上移去。
2. 用1x 洗涤缓冲液B洗涤玻片2 x 10 min。
3. 将玻片移至1x 洗涤缓冲液A中放置1 min。
4. 进入至复染操作步骤并将样品用如FITC标记的小鼠抗α-微管蛋白抗体孵育40 min。 - 如果抗体用于复染，则需要与Duolink检测采用不同的稀释比例。建议在复染抗体孵育前加入封闭步骤。
5. 用1x 洗涤缓冲液A洗涤玻片2 x 2 min。
6. 用0.01x 洗涤缓冲液B洗涤玻片1 min。
7. 按照Duolink In Situ荧光用户手册的第7.3节第7步中的实验方法进行封片。

上图： SK-BR-3细胞中HER2的单一识别。红色：PLA信号，每个代表一个HER2蛋白。绿色：α-微管蛋白复染。蓝色：核。PLA可探测抗兔PLUS及MINUS橙色，Duolink In Situ检测试剂。

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