蛋白質與核酸的相互作用
圖 1.涉及細胞和 DNA 蛋白相互作用的科學過程示意圖。左上方顯示「細胞」進行「交聯」和「裂解」，產生蛋白質和 DNA 的混合物。接下來的步驟包括「交聯逆轉」、幾個「洗滌步驟」和免疫沉澱。最後，底部序列描繪「DNA 純化與定量 PCR」，表示 DNA 與蛋白質的分析。
蛋白質是細胞內部的主力分子，負責細胞為了運作和存活而進行的各種生物活動。有趣的是，各種蛋白質也會與 DNA 互動。染色體內的 DNA 通常會緊緊包圍著蛋白質，這些蛋白質被稱為染色體內的染色體。這些蛋白質 - DNA 纖維束有助於將 DNA 包裝成細胞核內的緊湊形狀。研究人員已經開發出強大的分子工具和技術，用來分離這些蛋白質-DNA束和其他 DNA 結合蛋白複合物，以進一步進行下游應用。
免疫沉澱
免疫沉澱使用高度特異性的 RNA 和 DNA 結合蛋白抗體（如轉錄因子）。
目前有許多技術和方法可用於研究蛋白質-RNA 和蛋白質-DNA 互作，並適用於額外的下游分析。例如， chromatin immunoprecipitation (ChIP) assays are often used to investigate transcription factor-DNA interactions for gene expression and epigenetic modification studies.而 RNA沉澱 (RIP) 分析 常用於研究蛋白質與 mRNA、非編碼 RNA、miRNA 和病毒 RNA 的結合。免疫沉淀研究的一个常见挑战是抗体的特异性和或与相关蛋白的接触。為了迴避其中一些問題，研究人員會使用重組蛋白技術來表達具有獨特標籤的修飾蛋白，例如 hemagglutinin (HA) tag，可被適當的抗體高度特異性辨識。
Proximity Ligation Assay Technology
有趣的是，科學家們利用蛋白質-DNA 技術設計出評估蛋白質-蛋白質互作的新工具和方法。proximity ligation assay (PLA) technology facilitates in situ detection of endogenous proteins, protein modification, and protein interactions.類似於免疫共沉澱技術，PLA 分析使用高度特異性的一級抗體來識別兩個感興趣的蛋白質。然而，經修飾的寡核苷酸標記二抗（作為 PLA 探針）會用來與一抗結合。只有當兩種蛋白都存在且在附近時，雜交連結寡組才會與 PLA 探針結合。接合酶的加入會形成一個封閉的圓形 DNA 模板。有了新形成的圓形 DNA 模板，再加入 DNA 聚合酶就可以進行滾圓擴增，最終產生與 PLA 探針相連的大幅擴增信號。選擇適當的蛋白質與核酸互動技術，主要取決於研究人員的下游應用需求。
相關技術文章
- 瞭解 Proximity Ligation Assay 技術如何運作，以及蛋白質-蛋白質互作對照試劑盒如何確認 EGF 誘導的 EGFR-HER2 二聚化的原位檢測。
- Peptide synthesis up to 200 amino acids with HPLC purification, offering various purity levels, scales, and modifications.
- RNA 免疫共沉淀 (RIP) 是分析與 mRNA、小 RNA、病毒 RNA 或 lncRNA 互作並改變其功能的蛋白質的重要方法。
- Duolink® PLA 多色技術以及定量固定組織和細胞中蛋白質與蛋白質之間的相互作用。
- 包括建议和技巧、常见问题解答和基本故障排除的支持信息。
- 查看全部 (40)
相關通訊協定
- 本方案說明如何進行細胞和組織中蛋白質的免疫螢光檢測。
- Duolink®试剂盒使用原位PLA®技术（一种邻位连接检测技术）准确、客观地量化单个蛋白质，以及这些蛋白在未修饰细胞和组织中的互作和修饰。
- 上方视频介绍了如何在单次实验中通过简单直接的方法检测、定量和胞内定位蛋白质互作及其修饰情况。
- 本頁說明如何使用 Heparin Sepharose High Performance、Heparin Sepharose 6 Fast Flow、Cytiva 的 Capto Heparin 純化或移除 DNA 結合蛋白。
- 查看全部 (30)
尋找更多文章和協議
若要繼續閱讀，請登入或建立帳戶。
還沒有帳戶？