來自牛血漿的凝血酶原

Product No. T7513
Storage Temperature: -20 °C
CAS RN 9002-04-4
EC 3.4.21.5
Synonym：因子 IIa

產品說明

凝血酶原是一種內溶性絲氨酸蛋白酶，可選擇性地裂解纖維蛋白原的 Arg-Gly 鍵，形成纖維蛋白，並釋放出纖維蛋白肽 A 和 B。^1,2

凝血酶在體內的主要形式是凝血酶原，凝血酶原（因子 II），它在肝臟中產生。凝血脢原在正常人血漿中的濃度為 5-10 mg/dL。³凝血脢原是一種糖蛋白，其糖含量約為 12%。³

凝血脢原在體內被活化的因子 X 裂解，釋放活化肽，並將凝血脢原裂解成輕鏈和重鏈，產生具有催化活性的 α-凝血脢原。α-Thrombin 由一條輕鏈 (A 鏈，MW ~6 kDA) 和一條重鏈 (B 鏈，MW ~31 kDa) 組成。⁴ 人凝血酶的 B 鏈由肽部分 (MW 29,485 Da) 和碳水化合物部分 (MW 2,334 Da) 組成，在三個 Asn 殘基上有 N 連結的糖基化。^5,6牛凝血酶含有1.7%葡萄糖胺、1.8%矽酸、0.61%半乳糖和0.95%甘露糖。⁷

凝血酶還含有γ-羧基谷氨酰殘基。γ-羧基谷氨酰基殘基是 Ca²⁺ 依賴與帶負電荷的磷脂表面互動所必需的，而帶負電荷的磷脂表面是凝血酶原轉換為凝血酶的關鍵。⁴凝血脢原在體內是在磷脂膜表面活化的，磷脂膜與凝血脢原的氨基末端及因子 Va 和 Xa 結合。活化過程開始得很緩慢，因為因子 V 會被最初的少量凝血酶活化為因子 Va。

凝血酶的最佳裂解位點：²

1. A-B-Pro-Arg-||-X-Y，其中 A 和 B 是疏水氨基酸，X 和 Y 是非酸性氨基酸
2. Gly-Arg-||-Gly

任何哺乳類動物的凝血酶原都會凝結任何其他哺乳類動物的纖維蛋白原。⁸

凝血酶原對纖維蛋白原的裂解只發生在 Arg 殘基上；然而，裂解位點並不是特異性的，會產生 2 種產物。主要的裂解產物纖維蛋白肽 A 是在氨基酸 16 之後、有時也在氨基酸 19 之後從纖維蛋白原中裂解出來的，而次要的裂解產物纖維蛋白肽 B 則是在氨基酸 14 處裂解產生的。⁹

凝血酶不需要二價金屬離子或輔助因子才能產生活性。然而，Na⁺依賴異質激活凝血酶已被證明在定義凝血酶在 Arg 殘基後裂解的主要特異性上扮演一個角色。¹⁰ Thrombomodulin 在活化蛋白 C 的過程中作為凝血酶的輔助因子。¹¹

在某些儲存條件下，α-凝血酶原的自溶消化會形成β和γ-凝血酶原，它們缺乏纖維蛋白溶解活性，但對合成肽底物和纖維蛋白原以外的蛋白底物仍保留一些活性。¹² 此凝血酶製劑主要是α-凝血酶。

凝血酶（人和牛）將催化幾種肽p-硝基苯胺、甲苯基-Arg-硝基苯甲酯和硫代苄基酯合成底物的水解。¹³

催化pH範圍：¹⁴ 5-10，最佳pH：¹⁴ 8.3凝血酶沉澱≤pH 5

Human isozymes pI range：6.35-7.6.
牛 pI 範圍：¹⁵ 7.05-7.1

= 19.5 (牛)¹⁷

本品由含有生理鹽水和檸檬酸鈉緩衝液的溶液中凍乾，pH 值為 6.5。

特異活性：≥2,000 NIH 單位/mg 蛋白 ( = 19.5)

單位定義：NIH 分析程序使用 0.2 mL 稀釋血漿（與生理鹽水的比例為 1:1）作為底物，並根據 Biggs 方法的修改使用 0.1 mL 白蛋白溶液。¹⁸ 只有凝血時間在 15-25 秒的範圍內才可用於測定凝血酶活性。最佳凝血溫度為 37 °C。

文獻中凝血酶濃度通常以不同的活性單位來報告。^18,19 文獻中有幾種慣例用來表示凝血酶活性：

1 IOWA 單位 = 0.83 NIH 單位
1 WHO 單位 = 1 NIH 單位
1 NIH 單位 = 0.324 ± 0.073 mg
1 NIH 單位 = 1 USP 單位

注意事項和免責聲明

本產品僅供 R&D 使用，不得用於藥物、家庭或其他用途。請參閱材料安全資料表，以瞭解有關危害和安全處理實務的資訊。

製備說明

本產品可溶解於水（10 mg/mL），生成透明溶液。

儲存/穩定性

可在 0.1% (w/v) BSA 溶液中製備濃度為 100 單位/毫升的儲備溶液。儲備溶液在 0-5 °C 下可保持活性一週。溶液在 pH 6.5 時最為穩定，因為 pH >7 會大大降低凝血酶的活性。由於凝血酶溶液會吸附在玻璃上，因此建議將溶液等分裝入塑膠管中，並存放於 -20 °C 長期保存。

將凍乾粉末存放於 -20 °C。

合成底物：¹³

N-苯甲酰基-Phe-Val-Arg-p-硝基苯胺
N-Benzoyl-Phe-Val-Arg-p N-苯甲酰基-Phe-Val-Arg-4-甲氧基-β-萘甲酰胺
Boc-β-benzyl-Asp-Pro-Arg-7-amido-4-methylcoumarin
Boc-Val-Pro-Arg-7-amido-4-methylcoumarin
Sar-Pro-Arg p-nitroanilide
Thrombin generation chromogenic substrate
血栓素生成發色底物
p-Tosyl-Gly-Pro-Arg 7-氨基-4-甲基香豆素
N-(p-Tosyl)-Gly-Pro-Arg p-nitroanilide

抑制劑：^20-22

二異丙基氟磷酸酯
苯甲基磺酰氟
AEBSF
水蛭素
丙黃胺
α1-抗胰蛋白酶
α1-抗凝血酶
甲磺酸加貝沙酯
抗痛藥
Nα-對甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮鹽酸

材料

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