細胞計數與健康分析
在實驗或製造過程之前,必須對培養中的細胞進行計數,以監控倍增時間和進行量化。培養細胞不僅需要對增殖進行例行監測,還需要對存活率、細胞毒性和其他細胞健康指標進行監測。檢測方法的選擇取決於培養細胞的類型、研究應用以及所需的產量。在轉染、基因組研究、冷凍保存或其他操作中進行次培養或下游使用之前,對培養的細胞進行量化或計數至關重要。
特色類別
手動細胞計數
細胞計數室(如帶有 Neubauer 網格的血球計)是手動/可視細胞計數的常用裝置。小量的細胞懸浮液被裝入有網格的精密研磨玻璃裝置的細胞計數室中,在毛細作用下,細胞懸浮液分散在蝕刻過的網格上。在顯微鏡下可看到細胞,並使用手動計數器進行計數。預先定義的實驗室容積和網格系統可用來計算細胞濃度。目前已有可將計數過程自動化的影像系統。
自動細胞計數
許多自動細胞計數裝置使用與血球計數法相同的可視計數染料和原理。與依賴物體識別的自動細胞計數器不同,基於 Coulter 原理的設備因其可用性和精確度而廣受歡迎。Coulter 計數器將細胞懸浮液泵入感應器,感應器會根據電阻變化偵測細胞。這樣就能更可靠地檢測細胞,即使是小細胞,也能進行高準確度的細胞計數。手持式便攜型(類似吸管)可從培養罩中直接進行細胞計數。
細胞活力測試
DNA合成:監測細胞中活躍的 DNA 合成是某些細胞增殖檢測的基礎。DNA 複製可透過加入經修飾的核苷來測量,例如放射性 3H-Thymidine 或使用抗體偵測的非放射性溴化脫氧尿苷 (BrdU)。
新陳代謝活性:測量新陳代謝活性的量熱分析法適用於分析細胞增殖、細胞活力和細胞毒性。MTT、XTT 和 WST-1 等四唑鹽還原為有色的甲臢化合物只發生在代謝活躍的細胞中。ATP 的存在也是新陳代謝活性的指標。在萤火虫荧光素酶报告测定中,分裂细胞产生的 ATP 被用来氧化 D-荧光素,从而产生生物发光作为读数。
染料排除:胰藍染色常用於存活細胞計數。
熒光細胞活力分析:5(6)-羧基熒光素二乙酸酯 N-琥珀酰亞胺酯 (CFSE) 標記是測量細胞群中已完成細胞分裂週期數量的常用選擇。另一種膜穿透性染料 Calcein-AM 本身沒有螢光,但一旦在有活力的細胞中水解,就會發出強烈的綠色螢光。相比之下,核染料碘化丙啶 (PI) 只能通過已損壞的死亡細胞膜才能到達細胞核。由於 Calcein 和 PI-DNA 都可以用 490 奈米的光來激發,因此可以用單激發螢光顯微鏡同時監測活細胞/死細胞。
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