384 孔與 96 孔細胞因子分析

• 細胞激素如何與發炎相關？
• 多重定量分析結果
• Select MILLIPLEX^® Publications
• 參考文獻

慢性低水平炎症可導致危及生命的疾病。高靈敏度多重檢測板 讓研究人員能夠檢測低度細胞因子，一次研究多種細胞因子，深入探究這些過程。請繼續閱讀，看看 MILLIPLEX^® 人類高靈敏度 T 細胞檢測面板的 384 孔檢測格式和 96 孔檢測格式的性能比較。

細胞激素如何與炎症相關？

細胞激素是細胞信號傳導中重要的免疫調節多肽，在適應性和先天性免疫反應中扮演關鍵角色。細胞激素根據其來源或功能進行分類，包括白介素（作為 T 細胞之間的媒介）、趨化因子（負責 T 細胞遷移）、淋巴因子（由活化的 T 輔助 (Th) 細胞產生）和肌肉因子（由肌肉細胞產生）。

細胞因子在免疫反應的辨識、活化和/或效應階段起作用，調節 T 細胞、B 細胞和骨髓細胞的發育和功能活動。

細胞因子是炎症、免疫細胞發育和免疫細胞活化在正常和疾病狀態下的重要媒介。

細胞因子是正常和疾病狀態下，免疫細胞發育和免疫細胞活化的重要媒介。此外，有資料顯示，即使是低水平的慢性發炎，也會牽涉到許多臨床和亞臨界疾病狀態。

因此，涉及細胞因子的研究對於更深入瞭解免疫系統和驅動炎症過程的複雜交互作用至關重要，而炎症過程會直接導致危及生命的疾病。能夠可靠地檢測出低水平的細胞激素，並能同時研究多種細胞激素，將有助於加深對這些因素的瞭解。

高靈敏度 T 細胞 MILLIPLEX^® 多重檢測面板

基於 Luminex®xMAP^®技術，有兩種MILLIPLEX^®分析方法，兩種格式的分析物質完全相同：384 孔格式和 96 孔格式。MILLIPLEX^® 384 孔人類高敏感性 T Cell Panel (Cat.HSTC384-28K）和96孔版本的MILLIPLEX^®人類高敏T細胞檢測板（Cat.No.HSTCMAG-28S）。HSTCMAG-28SK）都是 21 複合多重檢測試劑盒，可同時檢測對 Th1、Th2 和 Th17 細胞有重要影響的細胞因子。這兩種分析板都是可客製化的，使用者可以在分析板中選擇任何數量的分析物，以滿足其特定的研究需求。此外，這兩種檢測板還提供預混合珠格式的 21 複合試劑盒。

384孔和96孔試劑盒使用規程比較

384孔和96孔試劑盒使用規程比較如表1所示。整體工作流程略有不同，主要歸因於 384 細孔格式（例如，需要使用 FLEXMAP 3D^® 或 xMAP^® INTELLIFLEX 儀器，建議使用洗板器，如 BioTek^® MultiFlo™ FX 自動洗板器）。384 孔洗板機可確保最佳效果。

對於血清樣品，在 1000 x g 離心 10 分鐘之前，先讓血液凝結 30 分鐘。使用 EDTA 抗凝劑的血漿樣本在採血後 30 分鐘內以 1000 x g 離心。取出血漿後立即進行化驗，或儲存於 -20 °C。使用前將冷凍樣本完全解凍、渦旋並離心，以去除微粒。整齊的樣品直接加入檢測板中。樣本來自紐約 Westbury 的 BioIVT。

多重定量分析結果

在所有試劑盒的開發、驗證和品質控制過程中，都進行了嚴格的性能研究，包括 確定適當的標準曲線範圍、交叉反應性、回收率、精確度和靈敏度。以下提供的數據顯示 384 孔試劑盒的性能與常用的 96 孔格式試劑盒不相上下，在某些情況下甚至更勝一籌。

標準曲線

MILLIPLEX^® 384孔和96孔人類高靈敏度T細胞檢測板的標準曲線分別如圖1a和圖1b所示。兩種檢測格式都顯示出寬廣的線性範圍，每種分析物的標準曲線範圍相同（以 pg/mL 為單位）。

若要更仔細地並排觀察個別分析物的標準曲線，圖 2顯示了選取的 384 孔和 96 孔分析物，並繪製在同一幅圖表上。

交叉反應性

使用單一標準物交叉反應性測試來研究測試中分析物的潛在交叉反應性。每種單獨的標準品均在多工珠和檢測抗體存在的情況下進行測試。所有標準品均與其他檢測的交叉反應性低於 5%。384 孔格式的交叉反應性數據與 96 孔格式試劑盒的交叉反應性數據相當（數據未顯示）。

檢測準確度和回收率

檢測準確度以已知量的標準品加到血清基質中的觀察濃度的百分比來確定。所有檢測的回收率在 79% 到 108% 之間。384 孔格式的檢測準確度數據與 96 孔格式試劑盒的檢測準確度數據相當，詳情請參閱 表 2。

精確度

經檢查八份重複標準對照的資料後，確定所有分析物的檢測內精確度 (%CV) 小於或等於 10%。對所有被分析物而言，檢測間精確度 (%CV) 被確定為小於或等於 25%，檢測數據來自 11 項獨立研究，每項研究都有重複的標準對照。384 孔格式的檢測間和檢測內精密度數據與 96 孔格式試劑盒的相近（表 3）。

化驗靈敏度比較 - 384孔與96孔試劑盒

根據最小檢測濃度(minDC)+2SD（表4），大多數化驗的靈敏度都低於1 pg/mL。標準曲線顯示面板中所有分析物的檢測線性範圍都很廣（圖 1a 和 1b）。

樣品檢測

初始樣品測試比較 384 孔和 96 孔格式的樣品檢測百分比。測試了 8 份健康捐獻者血清樣本和 8 份健康捐獻者血漿樣本，總共 16 份樣本，以測試化驗的靈敏度極限。低度發炎與許多臨床和亞臨床疾病有關，但要在表面看來健康的人身上找到能檢測低度細胞因子的檢測方法卻是一項挑戰。

兩種試劑盒格式檢測到分析物的頻率相似。表 5 顯示可檢測到的樣品數量 (逐一分析物)，而表 6 則顯示 384 孔格式與 96 孔格式可檢測到的樣品百分比。

關於樣品相關性，圖 3顯示 384 細孔和 96 細孔試劑盒針對特定分析物具有很高的樣品相關性。

384 孔象限性能

在 384 孔板的四個象限之間檢查特定分析物的標準值。低濃度和高濃度分析物對照（質量對照 1 和 2，QC1 和 QC2）的值一致（圖 4）。

384孔試劑盒的優點

低水平慢性發炎涉及許多臨床和亞臨床疾病狀態。因此，研究低水平的細胞激素表達將擴大我們對免疫系統和免疫細胞介導的發炎過程的了解。我們的 MILLIPLEX^® 384 孔人類高靈敏度 T 細胞檢測組為研究人員提供了許多好處，例如經分析驗證的檢測方法、優異的性能，與 96 孔版本相比，前者最多可檢測 182 個樣本，而後者最多可檢測 38 個樣本，並提供一式兩份的標準曲線和品質控制。

本試劑盒不僅能讓研究人員研究低水平的細胞因子表達，還能在生物相關的背景下，同時量化多種細胞因子的分泌水平。廣泛的測試顯示，384 孔格式產生的結果可媲美我們著名的 96 孔試劑盒。擁有 FLEXMAP 3D^® 或 xMAP^® INTELLIFLEX 系統的研究人員可以使用 MILLIPLEX^® 384 孔試劑盒，將單天的通量提高到約 17,000 個數據點。

材料

探索我們的 384 孔和 96 孔 MILLIPLEX^® 人類高敏感性 T 細胞面板選項。

僅供研究使用。不可用於診斷程序。

Select MILLIPLEX^® Publications