亞細胞定位研究中的細胞標記
亞細胞定位研究對於蛋白質的繪圖和定性非常重要，因此對於更好地理解蛋白質的細胞功能也非常重要。透過共聚焦顯微鏡分析人類細胞株，可以在細緻的細胞和亞細胞層面上可視化蛋白質的空間和時間表達模式。為了方便詮釋特定抗體所針對的蛋白質的亞細胞分佈，可使用細胞內不同的亞細胞結構、細胞器的參考標記對細胞進行染色。例如，在人類蛋白質圖集項目中，鈣網蛋白抗體被選作內質網（ER）的參考標記。圖 1 說明了這一點。例如，為了自動註釋共定位分析，每個要分析的亞細胞室都需要細胞器特異性標記。
圖 1. 抗 HSP90B1 (HPA003901) 染色以綠色顯示，核參考 DAPI 以藍色顯示，檢測 calreticulin 的內質網 (ER) 參考標記以黃色顯示。黃色信號與綠色抗體信號重疊，證實 ER 特異性。
Prestige Antibodies® Organelle Marker Panel
在與人類蛋白質圖集項目的合作中，我們開發了一些不同細胞器的參考標記，現在以第一版的 Organelle Marker Panel 發佈，針對細胞內 11 個不同的亞細胞結構。圖 3 和表 1。
面板上的細胞器標誌物主要是根據一些常用的人類細胞株（如 A-431、U-251 MG、U-2 OS、HeLa 和 MCF-7）的特定目標識別能力來選擇的。標記的其他選擇標準包括：高信噪比、根據 RNA Seq 資料蛋白質-RNA 表達的一致性、在 WB 中檢測到預期目標大小的帶，以及與其他針對相同蛋白質目標的抗體結果的陽性相關性。
這些單克隆細胞器標記是在與 Prestige 單克隆抗體相同的嚴格條件下共同開發的，這保證了產品的連續性和穩定供應。
本板中的大多數細胞器標誌物也建議用於 Western Blot (WB) 和免疫組織化學 (IHC) 應用，如 圖 2.
Anti-TUFM，細胞器標誌物的例子
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圖 2. 線粒體可以使用針對 TUFM（Tu 翻譯延伸因子）的抗體來檢測，TUFM 是一種專門在線粒體中表達的蛋白質。抗 TUFM 的單株抗體 AMAb90966 在多種應用中，包括免疫螢光免疫細胞化學 (IF-ICC)、顯色和螢光免疫組織化學 (IHC 和 IF-IHC)，以及 Western Blot (WB) 中，都能顯示特異性信號。A) 用 AMAb90966 對 HeLa 細胞株進行 IF-ICC 染色，可顯示線粒體產生明顯的免疫活性（綠色）。核仁顯示為藍色 (DAPI)，微管顯示為紅色。B) 人類結腸組織的 IHC-IF 染色，線粒體的 Anti-TUFM 免疫反應以綠色顯示，質膜以藍色顯示 (Anti-EZR，AMAb90979，IgG2b)，核以紅色顯示 (Anti-HNRNPC，AMAb91010，IgG2a)。這說明使用亞型特異性的二抗檢測時，可同時使用三種不同亞型的小鼠單株抗體。C) 人類皮膚的 IHC-IF 染色，Anti-TUFM 的免疫活性顯示為綠色，核顯示為藍色。D) 人體皮膚和 E) 胎盤的 IHC 染色。F) 人類細胞株 U251 MG (1)、A-431 (2)、U-2 OS (3) 及 MCF-7 (4) 的 WB 分析。
人類 HeLa 細胞株中 11 種不同細胞器的IF 影像
圖 3. 免疫螢光圖片顯示人類 HeLa 細胞株中 11 種不同的亞細胞器，使用單株抗體作為標記，抗體染色以綠色顯示。微管和核探針分別以紅色和藍色顯示（如有）。
細胞器標誌物面板中包含的單克隆抗體
這個細胞器標誌物面板是針對精選的重要亞細胞位置的小鼠單克隆抗體，用於繪圖、表征和揭示蛋白質在細胞過程中的作用，可作為染色和確認感興趣蛋白質位置的參考。面板成員已在儘可能多的細胞系中挑選出高 RNA 水準的成員，並在 ICC-IF 中在多達五個細胞系中進行驗證。其中大多數也通過 IHC 和 WB 驗證。所有面板成員均屬於 Prestige Antibody 品牌，並在相同的嚴格條件下開發，確保連續性和穩定供應。
關於人類蛋白質圖集計畫
人類蛋白質圖集計畫由瑞典研究人員於 2003 年發起，由 Mathias Uhlén 教授領導，並由 Knut and Alice Wallenberg 基金會資助。這是一項獨一無二的世界領導性工作，利用抗體對人類蛋白質體進行系統性探索。
人類蛋白質圖集計劃建立了完整的人類蛋白質體表達圖。為了達成這個目標，針對所有蛋白質編碼的人類基因開發出高度特異性的優質抗體，並使用組織陣列在多種組織和細胞中建立蛋白質剖析。表達資料可從特定應用的驗證中取得。應用範圍包括免疫組織化學、Western 印迹分析、蛋白質陣列分析和以免疫螢光為基礎的共焦顯微鏡。
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