APMB-RO

碱性磷酸酶

solution, from bovine (calf) intestine, 2 units/μg protein, optimum pH 7.5-9.5

• 别名: ALP, CAP, CIAP, cip, 小牛肠磷酸酶, 正磷酸单酯磷酸水解酶
• EC 号: 3.1.3.1 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSC代码: 12352204

属性

• 生物来源: bovine (calf) intestine
• 质量水平: 100
• 表单: solution
• 比活: 2 units/μg protein
• 包装: pkg of 1,000 U (10713023001 [1 U/μl]); pkg of 1,000 U (11097075001 [20 U/μl])
• 制造商/商品名称: Roche
• 参数: 37 °C optimum reaction temp.
• 最佳pH: 7.5-9.5
• 运输: wet ice
• 储存温度: 2-8°C

说明

一般描述

碱性磷酸酶（ALP）是一种普遍表达的糖蛋白。这种酶与细胞膜结合。ALP的激活需要必需的辅助因子，例如锌和镁。[1]碱性磷酸酶可催化从磷酸化的各种化合物中除去磷酸基团。[2]来自小牛肠的碱性磷酸酶可水解来自DNA和RNA的5′-单磷酸基团。它还可以水解RNA中的5′-二磷酸和5′-三磷酸基团。因此，肠道ALP是分子克隆常用的酶之一。[3]

应用

可使用这种小牛肠碱性磷酸酶制剂从DNA或RNA和免疫沉淀的RNA样品中去除5′-末端磷酸盐。[4][5][6][7]
注意：11097075001制剂含有高浓度的酶(20 U/μl)，便于大规模实验。10713023001制剂的浓度较低(1 U/μl)，便于小规模实验。

序列

AP是一种含锌酶，每分子含有4个锌原子（Efstradiatis，1977）。

单位定义

一个单位的碱性磷酸酶的酶活力单位表示，其在检测条件下，在+ 37℃，1分钟内可水解1 mol 4-硝基苯基磷酸酯。
注意：根据Moessner 等的研究。5单位碱性磷酸酶（+37℃;二乙醇胺缓冲液）对应于1单位碱性磷酸酶（+25℃;甘氨酸/NaOH缓冲液）。

单位换算：约3.6 U（MB级AP）
[+37℃，4-NPP作为底物，二乙醇胺作为缓冲剂，pH 9.8] = 1U [+25℃，4-NPP作为底物，甘氨酸作为缓冲剂，pH 10.5]。

体积活力：11097075001制剂为20 U /μl。 10713023001制剂为1 U /μl。

外形

10713023001：酶溶液(1 U/μl)，溶于储存缓冲液中，pH 7.6 (20 °C)

11097075001：酶溶液(20 U/μl)，溶于储存缓冲液中，pH 7.6 (20 °C)

制备说明

工作溶液：Storage buffer: 25mM Tris-HCl，1mM MgCl₂，0.1mM ZnCl₂，甘油50％（v/v），pH 7.6（4℃）。
储存条件（工作溶液）：储存缓冲液中的MB级AP稀释液（1至5 U/μl）在2至8°C下可稳定保存17个月。
较高的稀释度（~0.01 U/μl）应每天新鲜配制，并保存在2至8°C。
在克隆过程中防止载体的自我连接
如果线性化载体缺乏5′磷酸，则不能与自身连接或形成含有多个载体拷贝的连环体。因此，连接反应的产物主要则为重组DNA（载体+DNA插入物），而不会是重新连接的质粒。
失活：向反应混合物中加入1/10体积的EGTA，并在+65℃下孵育10分钟。为确保酶完全失活，可通过苯酚/氯仿/异戊醇对混合物进行抽提以除去所有蛋白质。

其他说明

用于一般实验室用途。

安全信息

• 储存分类代码: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• 闪点(°F): does not flash
• 闪点(°C): does not flash