CT01-5

MTT试剂A

Useful in the study of cell & mitochondrial health, MTT is a pale yellow substrate that is cleaved by living cells to yield a dark blue formazan product.

• 别名: MTT Formazan Assay
• 分類程式碼代碼: 12352207
• eCl@ss: 32161000
• NACRES: NA.32

属性

• 品質等級: 100
• 形狀: solid
• 製造商／商標名: Chemicon^®
• 技術: activity assay: suitable; cell based assay: suitable
• 運輸包裝: wet ice

说明

一般說明

试剂A：MTT，（3-（4，5-二甲基噻唑-2-基）-2，5-二苯基溴化四唑），50mg/瓶。

MTT是一种淡黄底物，可被活细胞裂解产生深蓝色甲臜产物。这个过程需要活跃的线粒体，即使是新死亡的细胞也不会裂解大量的MTT。试剂A是Chemicon MTT检测试剂盒的一个组成部分，货号CT01/CT02。

應用

程序：
1.使用标准方法，在光学质量良好的96孔平底组织培养板中进行淋巴因子、有丝分裂原或补体介导的细胞毒性试验（例如Falcon）。每孔中组织培养基的最终体积应为0.1 mL，培养基（例如RPMI或DMEM）可能含有高达10%的胎牛血清。

2.在试验结束时，向每个孔中加入0.01 mL AB溶液（MTT）。轻轻敲击托盘侧面进行混合。

3.在37°C下孵育，使MTT发生裂解。最佳时间可能因含量测定而异，但4小时适用于大多数目的。在这个时间结束时，在含有活细胞的孔中产生的MTT甲臜会在孔底部显示为黑色的、模糊晶体。

4.每孔加0.1 mL溶液C。用多通道移液器反复移液，充分混匀。HCl将组织培养基中的酚红转化为不干扰MTT甲臜测量的黄色。异丙醇溶解甲臜，得到适合吸光度测量的均匀蓝色溶液。

5.一小时内，在ELISA酶标仪上测定吸光度，测试波长为570 nm，参考波长为630 nm。在室温下放置数小时后，血清蛋白可能会由于酸/酒精而开始沉淀。冷却盘子会加速沉淀。如果测定前必须储存平板，在加入酸/酒精前保持在4°C，然后在读数前加热至室温并加入酸/酒精。

结果：
MTT测定法通常可检测典型细胞系的200至50,000个细胞，尽管1,000至50,000是有用的范围。对于其他细胞类型，此数字可能会有所不同。应建立细胞毒性测定，以使对照，未裂解的细胞的信号为0.2至0.4，并且增殖测定应在平台浓度下产生相似的值。对于典型的细胞系，这相当于每孔约20-50,000个细胞。

吸光度与细胞数成正比；即使浓度高达1 x 10⁶个细胞/mL，实际细胞也不会显著吸收。

法律資訊

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

安全信息

• 象形圖: GHS08,GHS07
• 訊號詞: Warning
• 危險聲明: H315,H319,H335,H341
• 防範說明: P201 - P202 - P261 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338 - P308 + P313
• 危險分類: Eye Irrit. 2 - Muta. 2 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• 標靶器官: Respiratory system
• 儲存類別代碼: 11 - Combustible Solids
• 水污染物質分類（WGK）: WGK 3
• 閃點（°F）: Not applicable
• 閃點（°C）: Not applicable