Rozdzielanie kwasów organicznych za pomocą 100% wodnej fazy ruchomej przy użyciu kolumny HPLC Ascentis^® Express AQ-C18

KWASY ORGANICZNE W ŻYWNOŚCI I ICH ANALIZA

Kwasy organiczne są naturalnie obecne w wielu produktach spożywczych, w tym w owocach, warzywach i winie. Co więcej, są one również powszechnie stosowane w przemyśle spożywczym jako konserwanty i stabilizatory. Oprócz metod analitycznych obejmujących reakcję kolorymetryczną i testy enzymatyczne, techniki chromatograficzne umożliwiają jednoczesną analizę większości kwasów organicznych. HPLC jest najpopularniejszą metodą analizy kwasów organicznych ze względu na jej prostotę, szybkość i stabilność. W związku z tym opracowano metodę HPLC do jednoczesnej analizy dziewięciu kwasów organicznych.

Niniejsza aplikacja ilustruje rozdział dziewięciu polarnych kwasów organicznych (Rysunek 1) na kolumnie Ascentis Express^® AQ-C18 przy użyciu 100% wodnej fazy ruchomej przy niskim pH. W tej metodzie wybrano długość kolumny 250 mm, aby zapewnić zadowalającą rozdzielczość przy rozsądnym czasie pracy dla analizy tej mieszaniny polarnych kwasów organicznych.

BADANE STRUKTURY CHEMICZNE KWASÓW ORGANICZNYCH

Rysunek 1a. Struktura chemiczna kwasu szczawiowego

Rysunek 1b. Struktura chemiczna kwasu winowego

Rysunek 1c. Struktura chemiczna kwasu jabłkowego

Rysunek 1d. Struktura chemiczna kwasu askorbinowego

Rysunek 1e. Struktura chemiczna kwasu mlekowego

Rysunek 1f. Struktura chemiczna kwasu octowego

Rysunek 1g. Struktura chemiczna kwasu cytrynowego

Rysunek 1h. Struktura chemiczna kwasu bursztynowego

Rysunek 1i. Struktura chemiczna kwasu fumarowego

WARUNKI EKSPERYMENTALNE DLA CHROMATOGRAFII KWASÓW ORGANICZNYCH

Warunki HPLC
Kolumna:	Ascentis® Express AQ-C18, 250 x 4.6 mm, 2.7 µm (577341-U)
Faza ruchoma:	20 mM bufor fosforanu potasu, pH 2.7, izokratyczny
Prędkość przepływu:	1 mL/min
Ciśnienie wsteczne:	306 bar (4452 psi)
Column temp.	40 oC
Detektor:	UV 214 nm
Iniekcja:	20 µL
Diluent:	Faza ruchoma
Próbka:	10 - 210 µg/mL w 20 mM buforze fosforanu potasu, pH 2.7

DANE CHROMATOGRAFICZNE ANALIZY KWASÓW ORGANICZNYCH ZA POMOCĄ HPLC-UV

Rysunek 2. Chromatogram przedstawiający piki uzyskane w analizie dziewięciu kwasów organicznych (kwas szczawiowy, kwas winowy, kwas jabłkowy, kwas askorbinowy, kwas mlekowy, kwas octowy, kwas cytrynowy, kwas bursztynowy i kwas fumarowy) na kolumnie Ascentis® Express AQ-C18.

Dane chromatograficzne kwasów organicznych w próbce

Peak No.	Związek	Stężenie w próbce (µg/mL)
1	Kwas szczawiowy	19
2	Kwas winowy	19
3	Kwas jabłkowy	76
4	Kwas askorbinowy	19
5	Kwas mlekowy	210
6	Kwas octowy	210
7	Kwas cytrynowy	210
8	Kwas bursztynowy	210
9	Kwas fumarowy	10

 

Wnioski

Kolumna Ascentis^® Express AQ-C18, oparta na cząstkach Fused-Core®, jest fazą związaną C18 przygotowaną przy użyciu zastrzeżonej procedury, która zawiera niewielką ilość polarnego silanu, który czyni fazę odporną na zwilżanie. Pozwala to użytkownikom fazy AQ-C18 na stosowanie wysoce wodnych (do 100%) faz ruchomych bez ryzyka zapadnięcia się fazy. Zmodyfikowana faza C18 wykazuje zwiększoną retencję związków polarnych w 100% wodnych warunkach, a także skuteczną separację kwasów organicznych.