HeLa-Mitotrap-Ap1g1-FKBP

15042203, human cervix, Epithelial, polygonal

• Kod UNSPSC: 41106514

Właściwości

• Nazwa produktu: HeLa-Mitotrap-Ap1g1-FKBP, 15042203
• pochodzenie biologiczne: human cervix
• opis: Human cervix carcinoma, knocksideways, rapid protein inactivation by rerouting to mitochondria for functional studies, adaptor protein (Ap1g1), genetically modified
• tryb wzrostu: Adherent
• morfologia: Epithelial, polygonal
• metody: cell culture | mammalian: suitable
• Warunki transportu: dry ice
• temp. przechowywania: −196°C

Opis

Opis linii komórkowej

Ta linia komórkowa może być wykorzystywana do określania funkcji białka poprzez szybką inaktywację białka będącego przedmiotem zainteresowania poprzez indukowane rapamycyną przekierowanie białka do mitochondriów.

HeLa-Mitotrap-Ap1g1-FKBP jest stabilnie transfekowaną linią komórkową HeLa wyrażającą dwa białka zawierające aktywność wiązania rapamycyny. Aby wygenerować tę linię komórkową, linia komórkowa HeLa-Mitotrap, ECACC 15042201, wyrażająca pojedynczy konstrukt wyrażający mitochondrialne białko wychwytujące zawierające domenę FRB (termin FRB odnosi się do białka zawierającego domeny FKBP12 i wiązania rapamycyny (FRB) w białku mTOR (mammalian Target of Rapamycin), został transfekowany drugim konstruktem wyrażającym podjednostki odporne na siRNA, znakowane FKBP podjednostki kompleksów białek adaptorowych (AP1) pęcherzyków pokrytych klataryną (CCV) wraz z domeną FKBP i domeną wiążącą rapamycynę z mitochondrialnym sygnałem celowania. Domena FKBP, FKBP jest komórkowym białkiem opiekuńczym i izomerazą prolilową, która jest celem wiązania rapamycyny i dimeryzuje z białkiem zawierającym FRB. Po traktowaniu rapamycyną docelowe białko zawierające domenę FKBP, np. AP1, dimeryzuje z domenami FRB i sekwestruje powstałe kompleksy białkowe do mitochondriów. Leczenie linii komórkowych zawierających zarówno białka wiążące rapamycynę FRB, jak i FKBP może sekwestrować białka docelowe do mitochondriów w ciągu kilku minut od leczenia, czyniąc komórki gotowymi do natychmiastowego testu.

Konstrukt ?-FKBP był oparty na plazmidzie pIRESneo2 kodującym odporną na siRNA formę a, która zawiera specyficzną dla mózgu wstawkę, która działa jak znacznik epitopowy (Motley i in., 2006, PMID: 17035630). Sekwencję kodującą FKBP amplifikowano metodą PCR i wstawiono do regionu łącznikowego ? Otwarta ramka odczytu została zsekwencjonowana, plazmid został transfekowany do komórek HeLaM, a klonalne linie komórkowe zostały wyizolowane zgodnie z wcześniejszym opisem (Motley i in., 2006).

pożywka hodowlana

Pożywka Dulbecco's Modified Eagle's Medium o wysokiej zawartości glukozy (DMEM) + 2 mM glutaminy + 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS)

Rutyna subkultury

Trypsynować hodowle przy 80% konfluencji za pomocą 0,05% trypsyny/EDTA. Obsadzić kolby 2 x^{104 komórkami/cm2}. Hodowle należy inkubować w nawilżanym 10%_CO2/90% powietrzem inkubatorze w temperaturze ^37oC.

Inne uwagi

Kultury pochodzące z kolekcji kultur PHE i dostarczone przez firmę Sigma są przeznaczone wyłącznie do celów badawczych. Zapytania dotyczące komercyjnego wykorzystania linii komórkowej są kierowane do deponenta linii komórkowej. Niektóre linie komórkowe mają dodatkowe specjalne warunki zwolnienia, takie jak wymóg wypełnienia umowy transferu materiału przez potencjalnego odbiorcę przed dostarczeniem linii komórkowej. Więcej informacji można znaleźć w Terms & Conditions of Supply.

Oświadczenie o zrzeczeniu się odpowiedzialności

Ta linia komórkowa ma specjalne warunki dopuszczenia: Organizacje komercyjne są zobowiązane do wypełnienia formularza "Zezwolenie na uwolnienie linii komórkowej do celów badawczych w organizacjach komercyjnych".

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.