KK5121

KAPA2G Fast Genotypisierungsmix

suitable for PCR, 2 ×

• Synonym(e): Genotypisierung, PCR
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for 500 reactions; 25 μL sufficient for 500 reactions
• Qualitätsniveau: 100
• Haltbarkeit: ≤18 mo.
• Leistungsmerkmale: dNTPs included; hotstart: no
• Hersteller/Markenname: Roche
• Konzentration: 2 ×
• Methode(n): PCR: suitable; genotyping: suitable
• Aufnahme: crude DNA
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Der KAPA2G Fast Genotypisierungsmix (2X) ist ein gebrauchsfertiger Master-Mix, der alle erforderlichen Komponenten für eine schnelle Polymerase-Kettenreaktion (PCR) enthält, jedoch ohne Primer und Template. Darüber hinaus enthält der ReadyMix^™ zwei inerte Farbstoffe, welche die Analyse von PCR-Reaktionsprodukte durch eine Agarosegel-Elektrophorese ermöglichen, ohne dass eine DNA-Ladelösung zugegeben werden muss. Das KAPA Express Extract System enthält eine für eine schnelle Probenlyse entwickelte thermostabile Protease. Das KAPA Express Extract, ein neues thermostabiles Protease- und Puffersystem, ermöglicht die Extraktion von PCR-bereiter DNA aus Mausgewebe in nur 15 Minuten sowie von KAPA2G Fast Genotypisierungsmix mit Farbstoff, der eine DNA-Polymerase enthält, die durch gerichtete Evolution für hohe Verarbeitbarkeit und Geschwindigkeit optimiert wurde. Die Kombination von KAPA Express Extract und KAPA2G Fast Genotypisierungsmix ermöglicht eine zuverlässige Extraktion und Amplifikation von DNA-Fragmenten aus Mausgewebe in nur 1 Stunde, während konventionelle Protokolle ≥1 Tag dafür beanspruchen.

Anwendung

KAPA2G Fast Genotypisierungsmix wird für folgende Anwendungen eingesetzt:

• Extraktion und Amplifikation aus murinem Schwanz-, Ohren- und Zehengewebe
• Extraktion und Amplifikation von DNA aus anderen Tiergeweben und Hybridomen
• Verwendung in der Polymerase-Kettenreaktion (PCR)

Biochem./physiol. Wirkung

Mit KAPA Express Extract extrahierte DNA wird mit dem KAPA2G Fast Genotypisierungsmix mit Farbstoff verstärkt. Durch KAPA2G Fast Genotypisierungsmix erzeugte DNA-Fragmente haben 3′-dA-Enden und können in TA-Klonierungsvektoren kloniert werden. Sie können außerdem für nachgelagerte Routineanalysen oder -anwendungen eingesetzt werden, wie u. a. beim Restriktionsenzymverdau sowie bei der Klonierung und Sequenzierung. Wie das Wildtyp-Taq weist auch KAPA2G Fast eine 5′→3′-Polymerase- und 5′→3′-Exonuklease-Aktivitäten, jedoch keine 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese-)Aktivität auf. Die Genauigkeit von KAPA2G Fast ist vergleichbar mit der von Wildtyp-Taq; die Fehlerquote liegt bei ca. 1 Fehler pro 1,7 x 10⁵ eingebauten Nukleotiden. Die Lyse wird in einem Thermocycler, Heizblock oder Wasserbad durchgeführt; anschließend wird die Probe zentrifugiert, um den DNA-haltigen Überstand zurückzugewinnen. Daraufhin wird der Überstand um das 10-fache verdünnt, bevor er als Template in der PCR verwendet wird. Im Gegensatz zu vorhandenen Protokollen, die sich auf den Proteinase-K-Verdau stützen, erfolgen mit KAPA Express Extract durchgeführte Extraktionen in einem einzigen Röhrchen, ohne dass gefährliche Chemikalien oder mehrere Waschschritte erforderlich sind. Dadurch wird das Risiko von Probenverlusten oder Kontaminationen erheblich reduziert. Der Prozess ergibt ein ausreichendes Template für mehrere Assays und kann problemlos für Proben in einem 96-Well-Format skaliert werden. Bei jeder Extraktion wird ein ausreichendes Template für mindestens 100 Genotypisierungen mittels PCR-Reaktionen erzeugt. Verdünnte oder unverdünnte Extrakte sind bei -15 °C bis -25 °C mindestens 6 Monate lang stabil.

Leistungsmerkmale und Vorteile

Höherer Durchsatz, schnellere Verarbeitungszeit und höhere Zuverlässigkeit:

• PCR-bereite DNA in nur 15 Minuten
• Reduzierte Gefahr von Probenverlust oder Kontamination durch minimale Handhabung
• Ausreichend Template für mehrere Assays; einfach skalierbar für Proben in einem 96-Well-Format
• Schnelle und zuverlässige Amplifikation von DNA-Fragmenten über eine große Bandbreite von Amplikon-Längen und GC-Gehalten

Übertrifft Rohextraktionsverfahren und kommerzielle Kits:

• Schnellere Verarbeitungszeiten
• Höhere Spezifität
• Reduzierte Kosten

Einige Anmerkungen:

• Extrahieren Sie PCR-fertige DNA aus murinem Schwanz-, Ohren- und Zehengewebe in 15 Minuten. Verdünnen Sie das DNA-Extrakt vor der PCR 10-fach in 10 mM Tris-HCl (pH-Wert 8,0–8,5) und verwenden Sie 1 μl DNA je 25- μl-Reaktion.
• Extrakte sind bei -20 °C >6 Monate haltbar.
• KAPA2G Fast (HotStart) Genotypisierungsmix enthält die entwickelte KAPA2G Fast DNA-Polymerase für die schnelle PCR sowie Puffer, MgCl₂ (1,5 mM bei1X) und dNTPs (je 0,2 mM bei 1X).
• Ladefarbstoff für die Elektrophorese ist im KAPA2G Fast Genotypisierungsmix enthalten, damit PCR-Produkte zur Analyse direkt auf Agarosegele geladen werden können.
• Verwenden Sie eine Glühdauer von 15 s und eine Extensionsdauer von 15 s für Amplikons von <1 kb Länge oder eine 15–30 s/kb Extension für längere Amplikons.

Qualität

Alle Komponenten der KAPA Maus-Genotypisierungskits werden strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, sind frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllen strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Angaben zur Herstellung

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die Langzeitaufbewahrung sollte bei -20 °C erfolgen. Vorausgesetzt, dass alle Komponenten sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert wurden, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur aufbewahrt wird.

Sonstige Hinweise

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Rechtliche Hinweise

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Nur Kit-Komponenten

• KAPA2G Fast DNA Polymerase
• KAPA2G Buffer A
• dNTPs 0.2 mM each at 1X
• MgCl₂ 1.5 mM at 1X
• stabilizers
• dye

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H371
• P-Sätze: P260 - P264 - P270 - P308 + P311 - P405 - P501
• Gefahreneinstufungen: STOT SE 2
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash