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KAPA2G Robust HotStart PCR-Kit

• Synonym(e): PCR-Kit
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for 1000 reactions; sufficient for 200 reactions; sufficient for 500 reactions; sufficient for 5000 reactions
• Qualitätsniveau: 100
• Haltbarkeit: ≤12 mo.
• Leistungsmerkmale: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included: no; hotstart
• Verpackung: pkg of 100 U (KK5522); pkg of 250 U (KK5515); pkg of 2500 U (KK5525); pkg of 500 U (KK5517)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): PCR: suitable
• Aufnahme: crude DNA
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Die KAPA2G Robust DNA-Polymerase der zweiten Generation wurde entwickelt, um das Problem inkonsistenter Amplifikation bei einer breiten Palette von Amplikontypen (GC- und AT-reich) zu beheben. Das KAPA2G Robust HotStart PCR-Kit bietet höhere Prozessivität und spezifische Aktivität, was wiederum eine stabile PCR-Leistung, eine hohe Sensitivität und eine hohe Toleranz gegenüber häufigen Inhibitoren bedeutet. Die hohe Leistung der KAPA2G Robust DNA-Polymerase ist ideal geeignet für schwierige PCR-Anwendungen und Proben und macht eine Optimierung mit mehreren Enzymen und Protokollen überflüssig.

Anwendung

KAPA2G Robust HotStart^® PCR Kit hat folgende Anwendungen:

• PCR-Amplifikation von Speichelproben
• PCR-Amplifikation für direktes Sequenzieren
• Nested PCR
• Amplifikation von GC- und AT-reichen Templates
• Templates mit gängigen PCR-Inhibitoren wie Salzen, Harnstoff, SDS oder Ethanol
• PCR von unverarbeiteten Proben wie Wangenabstriche und kultivierte Säugetier-, Hefe- oder Bakterienzellen
• Kolonien-PCR
• RT-PCR

Biochem./physiol. Wirkung

Mit KAPA2G Robust HotStart^® DNA-Polymerase generierte DNA ähnelt den Fragmenten, die mit Wildtyp-Taq-DNA-Polymerase generiert werden. Die Genauigkeit von KAPA2G Robust HotStart ist vergleichbar mit der von Wildtyp-Taq-Polymerase; die Fehlerquote liegt bei ca. 1 Fehler pro 1,7 x 10⁵ eingebaute Nukleotide. Es kann beim Restriktionsenzymverdau sowie der Klonierung und Sequenzierung verwendet werden. Wie das Wildtyp-Taq weist auch KAPA2G Robust HotStart eine 5′→3′-Polymerase- und 5′→3′-Exonuklease-Aktivität, jedoch keine 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese-)Aktivität auf.

Leistungsmerkmale und Vorteile

Effiziente Amplifikation von GC- und AT-reichen Targets

• Robuste Leistung bei einer breiten Palette von stark GC- und AT-haltigen Templates
• Höhere PCR-Erfolgsraten

Verbesserte Toleranz gegenüber häufigen PCR-Hemmern

• Effiziente Amplifikation aus Rohproben
• Höhere Ausbeute und Sensitivität pro Enzymeinheit

Unübertroffene Leistung bei Kolonien-PCR

• Höhere Ausbeute und verbesserte Konsistenz bei PCR direkt von E. coli- und Hefezellen

Einige Anmerkungen:

• KAPA2G Robust HotStart PCR-Kits enthalten KAPA2G Robust HotStart DNA-Polymerase, die speziell für eine hohe Prozessivität und Inhibitortoleranz entwickelt wurde.
• Sowohl aufgereinigte genomische DNA als auch Rohproben (z. B. Kolonien-PCR) können als Template verwendet werden.
• 0,5 U KAPA2G Robust HotStart DNA-Polymerase pro 25 μl Reaktion verwenden. Bei schwierigeren PCRs (GCrich, Rohprobe) sind unter Umständen höhere Enzymkonzentrationen erforderlich.
• 15 s/kb Extensionszeit pro Zyklus gewähren und diese bei schwierigen Amplikons oder Templates auf 30–60 s/kb erhöhen.
• KAPA2G Puffer enthalten 1,5 mM MgCl₂ bei 1X.
• Weiteres MgCl₂ kann unter Verwendung der 25 mM MgCl₂-Lösung aus dem Kit hinzugefügt werden.
• KAPA2G Puffer A ist optimiert auf hohe Ausbeute, Spezifität und Sensitivität.
• KAPA2G Puffer B wird empfohlen für Inhibitor-kontaminierte Templateproben.
• KAPA2G GC-Puffer wird empfohlen für PCR bei hohem GC-Gehalt (>70 % GC).
• KAPA Verstärker 1 kann mit KAPA2G Puffer A oder B verwendet werden, besonders für Assays bei hohem GC-Gehalt.
• Reaktionsprodukte haben 3′-dA-Enden und können in TA-Kloningvektoren geklont werden.

Qualität

Jede Charge der KAPA2G Robust HotStart DNA-Polymerase enthält nachweislich <2 % kontaminierendes Protein (Agilent Protein 230 Assay). KAPA2G Robust HotStart PCR-Kits werden strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, sind frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllen strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Angaben zur Herstellung

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die Langzeitlagerung sollte bei -20 °C erfolgen. Sofern alle Komponenten sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert wurden, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur belassen wird. Eine langfristige Lagerung bei Raumtemperatur und 4 °C wird nicht empfohlen. Beachten Sie bitte, dass Reagenzien, die bei Temperaturen über -20 °C gelagert werden, bei einer Kontaminierung während der Verwendung viel anfälliger für eine Zersetzung sind. Die Lagerung bei nicht empfohlenen Temperaturen erfolgt daher auf Risiko des Anwenders.

Sonstige Hinweise

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Rechtliche Hinweise

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

Nur Kit-Komponenten

• KAPA2G Robust Standard or HotStart^® DNA Polymerase 5 U/μL
• 5X KAPA2G Buffer A
• 5X KAPA2G Buffer B
• 5X KAPA2G GC Buffer with MgCl₂
• 5X KAPA Enhancer 1
• MgCl₂ 25 mM

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS07,GHS08
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H302,H371,H412
• P-Sätze: P260 - P264 - P270 - P273 - P308 + P311 - P501
• Gefahreneinstufungen: Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - STOT SE 2
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash