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KAPA2G Fast HotStart Readymix

2 ×, with dye

• Synonym(e): PCR
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 100
• Verwendung: sufficient for 100 reactions; sufficient for 500 reactions
• Haltbarkeit: ≤18 mo.
• Leistungsmerkmale: Fast PCR; Multiplex PCR; dNTPs included; hotstart
• Verpackung: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5608); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5609)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Konzentration: 2 ×
• Methode(n): PCR: suitable
• Aufnahme: purified DNA
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Die KAPA2G Fast DNA Polymerase ist ein Enzym der zweiten Generation (2G), das speziell für eine erhöhte Prozessivität und Geschwindigkeit entwickelt wurde und im Vergleich zur Wildtyp-Taq-Polymerase wesentlich kürzere Extensionszeiten bietet. Neben der Schnelligkeit liefert KAPA2G Fast in einem breiten Spektrum von Zielen auch höhere Ausbeuten und bessere Sensitivität als Enzyme anderer Hersteller.
Die KAPA2G Fast DNA Polymerase Kits wurden speziell für die Durchführung schneller PCR-Assays entwickelt. Damit kann gegenüber herkömmlichen mit Wildtyp-Taq-DNA-Polymerase durchgeführten PCR-Assays 20–70 % Reaktionszeit eingespart werden. Die Reaktionsleistung wird dabei in keiner Weise beeinträchtigt und es werden keine speziellen PCR-Verbrauchsmaterialien oder Thermocycler benötigt.
KAPA2G Fast HotStart^® DNA Polymerase wird in einem anwendungsfreundlichen 2X-ReadyMix-Format geliefert und enthält weder Primer und noch Templates. Der ReadyMix besteht aus KAPA2G Fast HotStart DNA Polymerase (0,5 U pro 25-μL-Reaktion) in einem proprietären Reaktionspuffer, der dNTPs (0,2 mM von jedem dNTPbei 1X), MgCl₂ (1,5 mM bei 1X) sowie Stabilisatoren enthält.

Anwendung

KAPA2G Fast HotStart^® ReadyMix^™ wird verwendet in:

• Routine-PCR
• Fast-PCR
• Genotypisierungen
• MASC-PCR (Multiplex Allele-spezifische Kolonien-PCR)
• Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zur Genotypisierung

Biochem./physiol. Wirkung

Die mit der KAPA2G Fast HotStart^® DNA-Polymerase generierte DNA kann für routinemäßige Downstream-Analysen oder -Anwendungen verwendet werden, einschließlich Restriktionsenzymverdau, Klonierung und Sequenzierung. Wie das Wildtyp-Taq weist auch KAPA2G Fast eine 5′→3′-Polymerase- und 5′→3′-Exonuklease-Aktivität, jedoch keine 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese-)Aktivität auf. Mit einer Fehlerrate von etwa 1 Fehler pro 1,7 x 10⁵ eingebauten Nukleotiden ist die Genauigkeit von KAPA2G Fast vergleichbar mit der von Wildtyp-Taq.

Leistungsmerkmale und Vorteile

Reduziert die Durchlaufzeit um bis zu 75 %:

• Extensionszeiten von nur 1 s pro Kilobase
• Breite Erfassung von AT- und GC-reichen Targets

Hohe Geschwindigkeit, höhere Leistung:

• Einzelkopie-Sensitivität in komplexen Zielsequenzen
• Erhöhte Erträge

Einige Anmerkungen:

• KAPA2G Fast HotStart ReadyMix PCR-Kits enthalten die speziell für eine schnelle PCR entwickelten KAPA2G Fast HotStart DNA-Polymerasen.
• Bei 1 s Extensionszeit für Amplikone <1 kb und 15 s/kb für längere Amplikone verkürzt sich die Gesamtreaktionszeit um 20 – 70 %.
• Es sind keine Spezialinstrumente oder PCR-Verbrauchsmaterialien erforderlich.
• Das optimierte Puffersystem verbessert Ertrag, Spezifität und Sensitivität und resultiert in einer effizienten Primer-Anlagerung (Annealing) über einen weiten Bereich von Primer-Längen, GC-Gehalten und Schmelztemperaturen.
• Für eine hohe Reaktionseffizienz sollte das Reaktionsvolumen 25 μl nicht überschreiten.
• KAPA2G Fast HotStart ReadyMix enthält 1,5 mM MgCl₂ bei 1X.
• KAPA2G Fast HotStart ReadyMix mit Färbung enthält einen inerten Tracking-Farbstoff, wodurch ein direktes Auftragen auf Agarosegele ermöglicht wird.
• Reaktionsprodukte haben 3′-dA-Enden und können in TA-Kloningvektoren geklont werden.

Qualität

Jede Charge der KAPA2G Fast DNA-Polymerase enthält nachweislich <2 % kontaminierendes Protein (Agilent Protein 230 Assay). KAPA2G Fast ReadyMix wird strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, ist frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllt strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Angaben zur Herstellung

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die Langzeitaufbewahrung sollte bei -20 °C erfolgen. Vorausgesetzt, dass alle Komponenten sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert wurden, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur gehalten wird. Eine langzeitige Lagerung bei Raumtemperatur und 4 °C wird nicht empfohlen. Beachten Sie bitte, dass Reagenzien, die bei Temperaturen über -20 °C gelagert werden, bei einer Kontaminierung während der Verwendung viel anfälliger für eine Zersetzung sind. Die Lagerung bei den nicht empfohlenen Temperaturen erfolgt daher auf Risiko des Eigentümers.

Sonstige Hinweise

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Rechtliche Hinweise

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H371
• P-Sätze: P260 - P264 - P270 - P308 + P311 - P405 - P501
• Gefahreneinstufungen: STOT SE 2
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash