ECM600

uPA-Aktivitätsassay-Kit

The uPA Activity Assay Kit provides a quick, efficient & sensitive system for evaluation of uPA activity & for screening of uPA inhibitors.

• UNSPSC-Code: 12161503
• eCl@ss: 32161000
• NACRES: NA.84

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 100
• Spezifische Aktivität: 100000 units/mg protein
• Speziesreaktivität: human
• Verpackung: pkg of ~10 μg standard
• Hersteller/Markenname: Chemicon^®
• Methode(n): activity assay: suitable
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NM_002658.2
• UniProt-Hinterlegungsnummer: P00749
• Nachweisverfahren: colorimetric
• Versandbedingung: dry ice
• Angaben zum Gen: human ... PLAU(5328)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Urokinase-Typ Plasminogen Aktivator (uPA) ist eine 52-kDa-Serinprotease, die an einer Reihe von physiologischen und pathologischen Prozessen beteiligt ist, einschließlich Geweberemodellierung1, Angiogenese2, Fibrinolyse und Tumorausdehnung. Wenn er an seinen Zelloberflächenrezeptor gebunden ist, wird uPA von der einzelkettigen Pro-Form uPA zu dem aktiven zweikettigen HMW-uPA umgewandelt. uPA spielt durch eine Kaskade, welche die Aktivierung von Plasminogen und Matrixmetallproteinasen involviert, eine Rolle beim Abbau der Basalmembran3. Inhibitoren von uPA verlangsamen das Tumorwachstum und die Metastasierung4-7.

Das CHEMICON uPA-Aktivitäts-Assaykit bietet ein schnelles, effizientes und empfindliches System zur Beurteilung der uPA-Aktivität und zum Screenen von uPA-Inhibitoren. Für diesen kolorimetrischen Assay wird keine Radioaktivität oder Fluoreszenz benötigt. Der Assay weist eine Sensitivität über einen Bereich von 0,05–50 Einheiten der uPA-Aktivität auf.

Testprinzip:

Im CHEMICON uPA-Aktivitätsassay-Kit wird ein chromogenes Substrat eingesetzt, das durch den aktiven uPA gespaltet wird. Die Zugabe von diesem Substrat zu einer uPA-haltigen Probe führt zu einem farbigen Produkt, das durch seine optische Dichte bei 405 nm (OD405) nachweisbar ist.

Anwendung:

Das CHEMICON uPA-Assay-Kit eignet sich hervorragend zur Messung der uPA-Aktivität in aufgereinigten Präparaten und Zellkulturen sowie in Serum unter pathologischen Bedingungen wie einer vorliegenden Sepsis. Des Weiteren ist der Assay beim Screening von Inhibitoren der enzymatischen Aktivität von uPA nützlich.

Jedes CHEMICON uPA-Aktivitätsassay-Kit enthält ausreichend Reagenzien zum Beurteilen von 96 Proben, einschließlich uPA aus humanem Urin als Positivkontrolle. Es wird empfohlen, Proben in doppelter oder dreifacher Ausführung zu verwenden.

Das CHEMICON uPA-Aktivitätsassay-Kit ist nur für Forschungszwecke vorgesehen, nicht für diagnostische oder therapeutische Anwendungen.

Anwendung

Anmerkungen zur Probenvorbereitung für den uPA-Aktivitätsassay.



Plasma: Führen Sie eine Venenpunktion der Cubitalvene mit minimaler Stase nach einer Ruhezeit von mindestens 10 min durch. Entsorgen Sie die ersten paar Milliliter Blut. Entnehmen Sie neun Volumina Blut in einem Volumen kaltem Natriumcitrat, 0,11 mol/l, in einem Polycarbonat-Röhrchen, mischen Sie es sanft und legen Sie es auf Eis. Stellen Sie anschließend thrombozytenarmes Plasma durch Zentrifugieren in einer gekühlten Zentrifuge (30 min, 2000 x g) her. Schockgefrieren Sie Plasmaproben von 0,3 ml bis 0,6 ml und lagern Sie sie bei -60 °C. Das Plasma vor dem Gebrauch schnell in einem Wasserbad bei 37 °C auftauen und auf Eis legen.



Gewebe: Es gibt zahlreiche Publikationen für die Extraktion von uPA aus Gewebe. Ein geeigneter Puffer für die Extraktion von uPA aus der Membranfraktion erfordert Triton X-100. Ein nicht-detergentes Extrakt (auch zytosolische Fraktion genannt) erfordert kein Triton, die Membranfraktion wird jedoch durch Ultrazentrifugieren entfernt, sodass die mit der Membranfraktion assoziierte uPA-Aktivität umgangen und nur die Zytosole gemessen werden. Referenzen, die Extraktionsverfahren für uPA beschreiben, finden Sie in Fachzeitschriften.

Zellkultur: Isolieren Sie den Zellkulturüberstand und verwenden Sie ihn direkt.

Forschungskategorie
Zellstruktur

Komponenten

uPA-Positivkontrolle: (Art.-Nr. 90058) Ein lyophilisiertes Fläschchen, 1000 Einheiten uPA aus Menschenurin.

Chromogenes Substrat: (Art.-Nr. 90057) Eine 5-mg-Flasche Tripeptid mit pNA-Gruppe.

Assaypuffer, 10X: (Art.-Nr. 90091) Eine 5-ml-Flasche.

Einheitendefinition

Sensitivität: Eine Einheit ist als die Menge eines Enzyms, die einem internationalen Standard entspricht, der mit der fibrinolytischen Methode von Johnson et al. getestet wurde, definiert {Johnson, A.J., et al. 1969. Thromb. Diath. Hämorrh. 21, 259.}

Lagerung und Haltbarkeit

Die Kitmaterialien können bei -20 °C bis zu 6 Monate aufbewahrt werden. Die uPA-Positivkontrolle nach der Rekonstitution bei -70 °C und das Substrat bei 2–8 °C aufbewahren.

Rechtliche Hinweise

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Haftungsausschluss

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H334
• P-Sätze: P261 - P284 - P501
• Gefahreneinstufungen: Resp. Sens. 1
• Lagerklassenschlüssel: 10 - Combustible liquids