おすすめの製品
由来生物
rabbit
品質水準
抗体製品の状態
purified antibody
抗体製品タイプ
primary antibodies
クローン
SC56-2, monoclonal
化学種の反応性
human, E. coli
化学種の反応性（ホモロジーによる予測）
all
テクニック
dot blot: suitable
western blot: suitable
アイソタイプ
IgG
輸送温度
wet ice
ターゲットの翻訳後修飾
phosphorylation (N3-pHis)
詳細
リン酸化は、細胞のタンパク質活性およびさまざまな細胞シグナリングイベントの制御において重要な役割を担っています。ホスホヒスチジン（pHis）の検出に利用できるツールには限りがあるため、ほとんどの研究はセリン、トレオニンおよびチロシンのリン酸化が中心となっています。ヒスチジンのリン酸化は、イミダゾール環のN1（1-pHis）およびN3（3-pHis）で生じます。1-pHisおよび3-pHisの安定ホスホリルトリアゾリルアラニンアナログ（1-pTzaおよび3-pTza）を有するペプチドの開発によって、シグナリングイベントにおけるヒスチジンN1およびN3のリン酸化を研究するための抗体の産生が可能となっています。がんおよび腫瘍転移におけるHisキナーゼに関連するエビデンスは増加しており、最初に同定された転移抑制遺伝子は、2つの既知の哺乳類Hisキナーゼのうちの1つNm23-H1（別名：NME1、ヌクレオシド二リン酸キナーゼまたはNDPK-A）です。Nm23-H1/NME1および極めて類縁のNm23-H2（NME2/NDPK-B）は、1-pHis酵素中間体を介して、ATPからヌクレオシド二リン酸（NDP）へのリン酸の転移を触媒します。Nm23-H1/-H2は、Hisキナーゼ活性も有し、活性部位のpHisから標的タンパク質のHisにリン酸を転移します。ホスホグリセリン酸ムターゼ（PGAM）、スクシニルCoA合成酵素（SCS）およびATPクエン酸リアーゼ（ACL）といった代謝酵素も、酵素中間体としてpHisを使用します。NME1/2とは異なり、PGAMは、酵素中間体として3-pHisを使用します。真核生物だけでなく、化学走性に関与する細菌の“2成分の”シグナル伝達経路でもヒスチジンのリン酸化がよく知られていますが、リン酸は受容体／センサータンパク質で形成されたpHisから受容体反応制御タンパク質のAsp残基に転移し、受容体／センサータンパク質は実質的にアスパラギン酸キナーゼとして機能します。
特異性
イミダゾール環のN3がリン酸化されたヒスチジン（3-pHis）を有するタンパク質を選択的に検出しますが、1-pHisは検出しません。
標的となる修飾は、種特異的ではありません。
アプリケーション
ドットブロット解析：3-pTzaホスホヒスチジン類似体を有するペプチドは検出しますが、リン酸化チロシンのみを含むペプチドは検出しません。クローンSC56-2は、NM23-H1/NME1 3-pHis118およびPGAM 3-pHis11の配列に基づく3-pTzaペプチドに対して最も反応性が高く、ACLY 3-pHis760、ヒストンH4 3-pHis18、またはKca3.1 3-pHis358配列に基づく3-pTzaペプチドに対する反応性はそれより低くなっており、GNB1 3-pHis266ベースの3-pTzaペプチドに対する反応性が最も低くなっています（Fuhs, S.R., et al. (2015)。Cell. 162(1):198-210）。
ウェスタンブロッティング：クローンSC56-2ハイブリドーマ培養上清は、形質転換E.Coli 由来ライセートにおいて外因的に発現させたヒトPGAM GST融合タンパク質の熱感受性ヒスチジンN3-リン酸化（3-pHis）のウェスタンブロッティングに使用しました（Fuhs, S.R., et al. (2015)。Cell. 162(1):198-210）。
注記：phosphohistidine検出前にサンプルを加熱しないこと。ヒスチジンリン酸化は、熱や酸に不安定です。特異性試験用のネガティブコントロールを作るため、サンプルの一部を95ºCで10～15分間加熱してヒスチジンリン酸化を元に戻すことができます。別の方法として、サンプルの一部を酸性pH下で、37ºCで15分間インキュベーションして、ヒスチジンリン酸化を還元することもできます。インキュベーション前に、各100 µLのサンプルを25 µLの1 M HClと共に酸性化した後、phosphohistidine検出前に25 µLの1 M NaOHで中和します。
ウェスタンブロッティング：クローンSC56-2ハイブリドーマ培養上清は、形質転換E.Coli 由来ライセートにおいて外因的に発現させたヒトPGAM GST融合タンパク質の熱感受性ヒスチジンN3-リン酸化（3-pHis）のウェスタンブロッティングに使用しました（Fuhs, S.R., et al. (2015)。Cell. 162(1):198-210）。
注記：phosphohistidine検出前にサンプルを加熱しないこと。ヒスチジンリン酸化は、熱や酸に不安定です。特異性試験用のネガティブコントロールを作るため、サンプルの一部を95ºCで10～15分間加熱してヒスチジンリン酸化を元に戻すことができます。別の方法として、サンプルの一部を酸性pH下で、37ºCで15分間インキュベーションして、ヒスチジンリン酸化を還元することもできます。インキュベーション前に、各100 µLのサンプルを25 µLの1 M HClと共に酸性化した後、phosphohistidine検出前に25 µLの1 M NaOHで中和します。
抗N3-ホスホヒスチジン（3-pHis）抗体、クローンSC56-2は異性体特異的モノクローナルAbで、N3の位置でリン酸化されたヒスチジンを特異的に検出します。この精製mAbは、ウェスタンブロッティングとドットブロットにおける性能を実証した発表済みデータにより裏付けされています。
品質
PGAMが触媒する2,3-DPG分解反応のウェスタンブロッティングにより評価されています。
ウェスタンブロッティング：0.52 µg/mLで使用、PGAMが触媒する2,3-diphosphoglycerate（2,3-DPG）分解反応のアリコート5 µg中でN3-phosphohistidine（3-pHis）を有するリコンビナントヒトphosphoglycerate mutase（PGAM）を検出できます。
ウェスタンブロッティング：0.52 µg/mLで使用、PGAMが触媒する2,3-diphosphoglycerate（2,3-DPG）分解反応のアリコート5 µg中でN3-phosphohistidine（3-pHis）を有するリコンビナントヒトphosphoglycerate mutase（PGAM）を検出できます。
ターゲットの説明
ヒスチジンリン酸化タンパク質に応じて異なります。
物理的形状
フォーマット：精製
その他情報
濃度：ロットに固有のデータシートを参照してください。
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保管分類コード
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 1
引火点(°F)
Not applicable
引火点(℃)
Not applicable
適用法令
試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。
Jan Code
MABS1352:
試験成績書（COA）
製品のロット番号・バッチ番号を入力して、試験成績書（COA） を検索できます。ロット番号・バッチ番号は、製品ラベルに「Lot」または「Batch」に続いて記載されています。
Lingyuan Kong et al.
Frontiers in microbiology, 13, 820089-820089 (2022-05-14)
In Streptococcus mutans, we find that the histidine kinase WalK possesses the longest C-terminal tail (CTT) among all 14 TCSs, and this tail plays a key role in the interaction of WalK with its response regulator WalR. We demonstrate that
LHPP suppresses gastric cancer progression via the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway.
Wang, et al.
Journal of Cancer, 13, 3584-3592 (2022)
Kevin Adam et al.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.), 2077, 209-224 (2019-11-11)
Immunofluorescence (IF) takes advantage of biological and physical mechanisms to identify proteins in cell or tissue samples, exploiting the specificity of antibodies and stimulated fluorescence light emission. Here, we describe an immunofluorescence staining method for the identification of histidine phosphorylated
Jianliang Zhang et al.
Oncogene, 42(6), 449-460 (2022-12-14)
Current clinical therapies targeting receptor tyrosine kinases including focal adhesion kinase (FAK) have had limited or no effect on esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). Unlike esophageal adenocarcinomas, ESCC acquire glucose in excess of their anabolic need. We recently reported that
Jianliang Zhang et al.
Cellular and molecular gastroenterology and hepatology, 8(1), 37-60 (2019-03-06)
Most targeted therapies against cancer are designed to block growth factor-stimulated oncogenic growth. However, response rates are low, and resistance to therapy is high. One mechanism might relate to the ability of tumor cells to induce growth factor-independent proliferation (GFIP).
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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