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ELISA BrdU (colorimetrica) di proliferazione cellulare

sufficient for ≤1,000 tests

• Sinonimo/i: proliferazione cellulare
• Codice UNSPSC: 41116158

Proprietà

• impiego: sufficient for ≤1,000 tests
• Livello qualitativo: 100
• Produttore/marchio commerciale: Roche
• tecniche: ELISA: suitable
• Metodo di rivelazione: colorimetric
• Temperatura di conservazione: 2-8°C

Descrizione

Descrizione generale

Analisi immuno-colorimetrica per la quantificazione della proliferazione cellulare, basata sulla misura della incorporazione di BrdU nella sintesi del DNA:  Un′alternativa non radioattiva alla prova di incorporazione di [³H]-timidine.

Specificità

L′anticorpo coniugato reagisce con l′analogo della timidina 5-bromo-2′-deossiuridina (BrdU) e con BrdU incorporata nel DNA. Per legarsi alla BrdU incorporata nel DNA, il DNA marcato con BrdU deve essere denaturato. L′anticorpo non ha reazioni incrociate con nessun componente cellulare endogeno come timidina, uridina o DNA.

Applicazioni

Per soli scopi di ricerca. Non usare per applicazioni diagnostiche.
Il kit per saggio colorimetrico di proliferazione cellulare mediante ELISA con BrdU appartiene alla seconda generazione, perfezionata, di kit per misure della sintesi del DNA. È un′alternativa colorimetrica precisa, rapida e semplice per quantificare la proliferazione cellulare sulla base dell′incorporazione di BrdU durante la sintesi del DNA in cellule in replicazione. Il kit per saggio di proliferazione cellulare mediante ELISA può essere impiegato in molti sistemi cellulari in vitro diversi. Per esempio:

• rilevazione e quantificazione della proliferazione cellulare indotta da fattori di crescita e citochine
• determinazione dell′attività inibitoria o stimolante sulla proliferazione cellulare di diversi composti in ricerche ambientali e biomediche e in ambito alimentare, cosmetico e farmaceutico
• misura della immunoreattività dei linfociti stimolata da mitogeni o antigeni
• analisi della chemiosensibilità di cellule tumorali a differenti farmaci citostatici nella ricerca medica
• test di biocompatibilità di vari scaffold impiegati nell′ingegneria tissutale per la crescita delle cellule ossee.

Confezionamento

1 kit comprende 6 componenti.

Nota sulla preparazione

Concentrazione di lavoro: L′anticorpo del kit (anti-BrdU-perossidasi) ha, dopo ricostituzione, una concentrazione di 7,5 U/mL, dopo diluizione, di 0,075 U/mL. Invece dell′anticorpo del kit, si può anche usare l′anticorpo anti-BrdU, frammenti Fab. Questo anticorpo è a concentrazione doppia che va diluita 1:200 dopo ricostituzione in 1 mL.
Soluzione di lavoro: Soluzione per la marcatura con BrdU

Diluire il reagente di marcatura con BrdU 1:100 con terreno di coltura sterile (concentrazione risultante: BrdU 100 μM).
Per una micropiastra a 96 pozzetti, se le cellule sono state coltivate in 100 μL/pozzetto (10 μL/pozzetto) è necessario 1 mL di soluzione di marcatura con BrdU, mentre se le celle sono coltivate in 200 μL/pozzetto (20 μL/pozzetto) servono 2 mL di soluzione.

Soluzione madre di anti-BrdU-perossidasi

Sciogliere l′anti-BrdU-perossidasi in 1,1 mL di acqua bidistillata per 10 minuti e miscelare a fondo.

Soluzione di lavoro di anti-BrdU-perossidasi

Diluire la soluzione madre di anti-BrdU-perossidasi 1:100 con la soluzione di diluizione dell′anticorpo. Per una micropiastra a 96 pozzetti diluire 100 μL di soluzione madre di anti-BrdU-perossidasi in 10 mL di soluzione di diluizione dell′anticorpo

Soluzione di lavaggio

Diluire il tampone di lavaggio concentrato 1:10 con acqua bidistillata.
Per una micropiastra a 96 pozzetti diluire 10 mL di tampone di lavaggio concentrato con 90 mL di acqua bidistillata.
Condizioni di stoccaggio (soluzione di lavoro): soluzione di marcatura con BrdU
Reagente di marcatura con BrdU non diluito (1000x): da 2 a 8 °C per parecchi mesi al riparo dalla luce.
Reagente di marcatura con BrdU diluito : stabile per parecchie settimane tra 2 e 8 °C. Conservare al riparo dalla luce. Per lo stoccaggio a lungo termine si raccomanda di conservare la soluzione di marcatura con BrdU in aliquote a temperature tra -15 e -25 °C.
Soluzione madre di anti-BrdU-perossidasi
A temperature tra 2 e 8 °C per parecchi mesi. Per lo stoccaggio a lungo termine si raccomanda di conservare la soluzione in aliquote a temperature tra -15 e -25 °C
Soluzione di lavoro dell′anti-BrdU-perossidasi
Preparare poco prima dell′uso. Non conservare.
Soluzione di lavaggio
A temperature tra 2 e 8 °C per parecchie settimane.

Ricostituzione

La soluzione di lavoro per l′anticorpo dovrebbe essere una salina tamponata da fosfato contenente l′1% di BSA a pH 7,4

Altre note

Esclusivamente per ricerche life science. Non usare in procedure diagnostiche.

Solo come componenti del kit

• BrdU Labeling Reagent
• FixDenat ready-to-use
• Anti-BrdU-peroxidase antibody
• Antibody Dilution Solution ready-to-use
• Washing Buffer PBS 10x concentrated
• Substrate Solution TMB ready-to-use

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS02,GHS07,GHS08
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H225,H317,H319,H340
• Consigli di prudenza: P201 - P210 - P233 - P280 - P308 + P313 - P370 + P378
• Classi di pericolo: Eye Irrit. 2 - Flam. Liq. 2 - Muta. 1B - Skin Sens. 1
• Codice della classe di stoccaggio: 3 - Flammable liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1