SCR508

TAT-CRE ricombinasi

TAT-CRE Recombinase is a recombinant cell-permeant fusion cre-recombinase protein consisting of TAT sequence, a nuclear localization sequence (NLS) and it is known to catalyze the site specific recombination event between two loxP DNA sites.

• Sinonimo/i: Integrase, Recombinase Cre, cre recombinase
• Codice UNSPSC: 12352204
• eCl@ss: 32160405
• NACRES: NA.75

Proprietà

• Origine biologica: Escherichia coli
• Livello qualitativo: 100
• Ricombinante: expressed in E. coli
• Saggio: >70% (SDS-PAGE)
• Forma fisica: liquid
• tecniche: cell culture | stem cell: suitable
• Condizioni di spedizione: dry ice

Descrizione

Descrizione generale

La Cre ricombinasi è un enzima proveniente dal batteriofago P1 che catalizza la ricombinazione sito-specifica tra due siti di riconoscimento del DNA denominati siti loxP. Il sito di riconoscimento LoxP consiste in due ripetizioni invertite di 13 pb che fiancheggiano una regione spaziatrice di 8 pb. Poiché il gene Cre e i siti loxP non sono presenti nei genomi della maggior parte delle specie, i siti LoxP possono essere ingegnerizzati e introdotti nelle cellule bersaglio e quindi utilizzati come mezzo per controllare con precisione l'espressione dei geni sia in vitro (cioè in cellule coltivate) che in vivo (cioè in modelli animali).

• Se i siti LoxP sono localizzati su cromosomi diversi, la Cre ricombinasi medierà una traslocazione cromosomica.
• Se sono orientati in direzione opposta, la Cre ricombinasi medierà un'inversione della sequenza che si trova tra i due siti (segmento “floxed”).
• Se sono orientati nella stessa direzione, la ricombinasi medierà una delezione del segmento floxed.

In questo modo la diversa posizione e l′orientamento dei siti LoxP consentirà l′attivazione o la repressione dei geni o il loro scambio con altri geni.

La TAT-CRE ricombinasi di EMD Millipore è una proteina di fusione ricombinante permeabile alle cellule che consiste in un peptide basico di traslocazione della proteina derivato dall'HIV-TAT (TAT), una sequenza di localizzazione nucleare (NLS), la proteina Cre e un tag di istidina N-terminale (H6) per un'efficiente purificazione da E. coli.

È stato dimostrato che la TAT-CRE ricombinasi di EMD Millipore excide efficacemente i transgeni virali STEMCCA dalle cellule IPS sia umane che murine.

Applicazioni

EMD Millipore ha sviluppato una proteina di fusione TAT-CRE ricombinasi permeabile alle cellule che può essere somministrata direttamente alle cellule di mammifero e che risulta in elevate efficienze di ricombinazione (75 – 100% in cellule di topo e ~ 60% in cellule umane). La TAT-CRE si trasloca facilmente nelle cellule di mammifero e può catalizzare una ricombinazione molto efficiente. La dose e il momento dell'esposizione alla Cre possono essere controllati con precisione, consentendo una titolazione accurata della attività della Cre.

Qualità

Ogni lotto di proteina TAT-CRE ricombinasi è sottoposto a rigoroso controllo della qualità per i seguenti parametri:

• Purezza: in SDS-PAGE si ottiene una singola banda intorno a 41 kDa, con una purezza proteica superiore al 70%.
• Attività funzionale: media la ricombinazione di alleli modificati con loxP in una linea cellulare reporter HEK293T-Cre.
• Livelli di endotossina: meno di 1 EU/ug di proteina.

Definizione di unità

Uno standard di 100 Unità è definito come la quantità di TAT-CRE (ug) in 1,0 mL di terreno per colture dei tessuti necessaria per indurre il 50% dell'espressione di GFP in un saggio con linea cellulare reporter HEK293T loxp.

Stato fisico

La proteina ricombinante è fornita in tampone contenente il 50% di glicerolo (v/v), 500 mM di NaCl e 20 mM di HEPES a pH 7,4.

Stoccaggio e stabilità

Stabile per 3 mesi dalla data di ricevimento se conservato a -20°C o a -80°C. Al primo scongelamento, centrifugare il flaconcino e mescolare delicatamente la soluzione. Suddividere in volumi di lavoro più piccoli e congelare a -20°C o -80°C. Prima dell'uso, diluire la TAT-CRE alla concentrazione appropriata in terreno di coltura e filtrare con un filtro per siringa da 0,2 um a basso legame proteico (Millipore N. Cat. SLGV 033RS or SLGV013 SL).

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 10 - Combustible liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1