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分子克隆与蛋白表达

描述蛋白表达过程的示意图,从表达质粒开始到表型,步骤包括细胞核转录、翻译和定位,最后纯化。示意图用颜色区分,粉色代表整体过程,黄色突出细胞核。文字说明包括“表达质粒”、“细胞核”、“转录”、“mRNA”、“翻译”、“表型”、“定位”和“纯化”。

分子克隆的目的是将目的基因(GOI)插入质粒载体,后者是一种环状的DNA,包含各种有助于克隆、克隆选择和蛋白表达的要素。研究人员常使用DNA限制酶和连接酶将GOI阅读框插入表达载体中进行后续蛋白的表达,随后又将该载体插入细胞中进行GOI编码的蛋白表达,或使用无细胞蛋白合成系统完成蛋白表达。  

蛋白表达一经完成,研究人员便可根据蛋白对细胞信号传导、形态等细胞内各方面的影响对蛋白功能进行研究。另外,蛋白经批量表达和纯化后还可在很多下游工序中应用。如需更多信息,请探索我们可靠齐全的试剂和资源,了解其如何应用于昆虫、细菌和哺乳动物蛋白表达系统克隆和表达工作流程。

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限制酶和DNA修饰酶

在分子克隆领域,研究人员在连接步骤之前,通常使用两种通用酶:用于切割DNA的限制酶和用于核酸修饰的修饰酶。浏览我们全面的限制酶和其它修饰酶,例如碱性磷酸酶、蛋白酶、T7 RNA聚合酶、核糖核酸酶A和T4 DNA连接酶,以满足您的所有研究需求。

采用CMV启动子和FLAG®标记技术的无细胞表达系统和表达载体

我们的克隆和表达产品组合提供配备精简实验方案和克隆试剂盒的一系列多功能载体,使基因工程操作更便宜、更高效。选择我们全面的克隆和表达系统,包括我们的无细胞蛋白质合成或表达系统, 如下一代无细胞蛋白质表达试剂盒 (小麦胚芽) (产品编号 CFPS700) 和ALiCE®试剂盒 (货号 AL0103000)。此外,请浏览可在瞬时或稳定转染系统中进行周质或细胞质表达的细菌和哺乳动物 FLAG® 表达载体, 并自信地在N-末端或C-末端表达FLAG®或3X FLAG® 序列,如果需要用通过肠激酶(Ek)裂解位点去除融合标签。

Novagen® pET 系统、SnapFast™ 载体、Simplicon™ 载体和UCOE™ 蛋白质表达系统

所有大肠杆菌表达载体和昆虫表达载体均导致氨苄青霉素抗性,以便于选择阳性转化体。请探索Novagen®pET系统,它是在细菌中克隆和表达重组蛋白的黄金标准。由Oxford Genetics设计的SnapFast™载体系列提供了一种快速简便的操作方案,可采用SnapFast™切割位点将GOI从一种载体转移到另一种载体,从而生成与昆虫、酵母、细菌和哺乳动物表达系统兼容的载体 。借助我们的遍在染色质开放表达元件(UCOE™)表达载体技术,您可以在不到30天的时间内在稳定转染的哺乳动物细胞中获得数克蛋白质。UCOE™表达技术可防止转基因沉默,并提供一致、稳定和高水平的基因表达,无论其染色体整合位点如何,其表达量最多比传统载体高20倍。Simplicon™体内蛋白质表达系统是一个非基因组整合的、可调节的、合成的、基于自我复制的RNA表达系统,可使多个基因在转染的人类细胞中产生快速、高度持续的蛋白质表达,没有基因组整合的风险。如需更多信息,请参阅我们的用于高效地产生人类iPSC的Simplicon™技术视频

细菌和酵母转化试剂和资源

细菌转化是采用热休克和电穿孔等方法将外源DNA插入细菌的过程。我们的感受态细胞产品组合经过精心设计,即使是最具挑战性的重组蛋白质也能实现最佳蛋白质表达。请浏览我们的感受态细胞选择指南,针对包括蛋白质表达、常规或困难克隆以及文库生成等各种应用,从多种新型细菌感受态细胞中进行选择。另外,在酿酒酵母中进行重组蛋白表达有许多优点,例如操作简单、使用碱性试剂和可扩展性。探索多种酵母转化用产品,这些产品是蛋白质表达工作流程的一部分。我们的NovaBlue®感受态细胞针对转染效率和质粒保存进行了优化,有助于文库制备和质粒稳定性。此外,Novagen®感受态细胞可促进正确的蛋白质折叠,增加溶解度或细胞毒性蛋白质的表达。最受欢迎的品牌是Rosetta™、Origami™和Overnight Express™系统。



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