感受态细胞选择及大肠杆菌标志物指南

我们可提供一系列大肠杆菌细菌细胞，通过对每种菌株特异的优化程序，使其成为具有最高效率的感受态细胞。共有24种适用于各种应用的新型感受态细胞可供选用，这些应用包括蛋白质表达、常规或困难的克隆、以及文库的生成。有多种试用规格可供选用。

表1. 感受态细胞

应用	产品编号	产品描述	转化效率	基因型	蓝白筛选能力
用于蛋白质表达和DNA质粒产生	CMC0001	SIG10 化学感受态细胞	≥ 1 × 108	F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) endA1 recA1 Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK rpsL nupG λ- tonA	Y
用于蛋白质表达和DNA质粒产生	CMC0002	SIG10 F‘化学感受态细胞	≥ 5 × 108	[F´ pro A+B+ lacIqZΔM15::Tn10 (TetR)] /mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) endA1 recA1 Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK rpsL nupGλ tonA	Y
用于蛋白质表达和DNA质粒产生	CMC0003	SIG10 HIGH电感受态细胞	≥ 5 × 108	F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) endA1 recA1 Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 araD139 Δ(ara,leu)7697galU galK rpsL nupG λ- tonA (StrR)	Y
用于蛋白质表达和DNA质粒产生	CMC0004	SIG10 MAX电感受态细胞	≥ 2 × 1010	F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) endA1 recA1 Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 araD139 Δ(ara,leu)7697galU galK rpsL nupG λ- tonA (StrR)	Y
用于一般克隆和产生文库	CMC0005	SIG10 F' MAX电感受态细胞	≥ 5 × 108	[F´ pro A+B+ lacIqZΔM15::Tn10 (TetR)] /mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) endA1 recA1 Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK rpsL nupG λ- tonA (StrR)	Y
用于一般克隆和产生文库	CMC0006	SIG10 ULTRA电感受态细胞	≥ 5 × 108	F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) endA1 recA1 Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 araD139 Δ(ara,leu)7697galU galK rpsL nupG λ- tonA (StrR)	Y
用于一般克隆和产生文库	CMC0007	SIG10 5a化学感受态细胞	≥ 5 × 108	fhuA2Δ(argF-lacZ)U169 phoA glnV44 Φ80 Δ(lacZ)M15 gyrA96 recA1 relA1 endA1 thi-1 hsdR17	Y
用于使用不稳定的DNA产生质粒	CMC0008	STEADY 化学感受态细胞	> 1 × 107	recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR) xyl-5 λ– leu mtl-1 F– mcrB mrr hsdS20(rB–, mB–)	N
用于使用不稳定的DNA产生质粒	CMC0009	STEADY电感受态细胞	> 1 × 107	recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR) xyl-5 λ– leu mtl-1 F– mcrB mrr hsdS20(rB–, mB–)	N
用于制备诱变用的含尿嘧啶的DNA	CMC0010	CHANGER电感受态细胞	1 × 109	[F’ Tra+ Pil+ (CamR)] ung-1 relA1 dut-1 thi-1 spoT1 mcrA	N
用于BAC和粘粒克隆	CMC0011	XLDNA V2电感受态细胞	≥ 5 × 108	F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) endA1 recA1 Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 araD139 Δ(ara,leu)7697 galUgalK rpsL nupG (attL araC-PBAD-trfA250 bla attR) λ-	Y
用于BAC和粘粒克隆	CMC0012	XLDNA SIG10 电感受态细胞	≥ 5 × 108	F - pro A+B+ lacIqZΔM15::Tn10 (TetR)] /mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) endA1 recA1 Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK rpsL nupG λ- tonA (StrR)	N
用于产生生物素化蛋白质	CMC0013	BIOTINYLATER F' 电感受态细胞	>1 ×1010	MC1061 [F´ pro A+B+ lacIqZΔM15::Tn10 (TetR)] araD139 ∆(ara-leu)7696 ∆(lac)l74 galU galK hsdR2(rΚ- mΚ+) mcrB1 rpsL (StrR) birA	N
用于蛋白质表达	CMC0014	BL21（DE3）化学感受态细胞	≥ 5 × 108	F – ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)	N
用于蛋白质表达	CMC0015	BL21(DE3) pLysE化学感受态细胞	≥ 5 × 108	F – ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)	N
用于蛋白质表达	CMC0016	BL21(DE3) 电感受态细胞	≥ 5 x 109	F – ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)	N
用于最高蛋白质表达	CMC0017	OverExpress C41(DE3) 化学感受态细胞	≥ 5 × 108	F – ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)	N
用于最高蛋白质表达	CMC0018	OverExpress C41(DE3) pLysS化学感受态细胞	≥ 5 × 108	F – ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3) pLysS (CmR)	N
用于最高蛋白质表达	CMC0019	OverExpress C43(DE3) 化学感受态细胞	≥ 5 × 108	F – ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)	N
用于最高蛋白质表达	CMC0020	OverExpress C43(DE3) pLysS化学感受态细胞	≥ 5 × 108	F – ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3) pLysS (CmR)	N
用于最高蛋白质表达	CMC0021	OverExpress C41(DE3) 电感受态细胞	≥ 5 × 108	F – ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)	N
用于最高蛋白质表达	CMC0022	OverExpress C43(DE3) 电感受态细胞	≥ 5 × 108	F – ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)	N
用于受控的蛋白质表达	CMC0023	CONTROLLER SIG10 化学感受态细胞 。	> 1 × 109	mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) endA1 recA1 ɸ80dlacZΔM15 ΔlacX74 araD139 Δ (ara,leu)7697 galU galK rpsL (StrR) nupG λ− tonA Mini-F lacIq1 (GentR)	N
用于受控的蛋白质表达	CMC0024	CONTROLLER BL21(DE3) 化学感受态细胞	> 1 × 107	F- ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3) Mini-F lacIq1(GentR)	N

表2. 大肠杆菌标志物指南

大肠杆菌标志物	描述
dam	甲基化GATC位点的Adam甲基模式用于区分旧的（甲基化的）和新的（未甲基化的）链，以达到损伤修复的目的（修复未甲基化的链）。Dam甲基化也用于计时复制（在两条链都被Dam甲基化之前不要复制）。这种甲基化会干扰几种限制性内切酶，包括BclI和ClaI。
dcm	甲基化CCWGG。
dnaJ	伴侣蛋白。突变体可以稳定大肠杆菌中的一些蛋白质。
dut	dUTP酶，一种通过破坏dUTP防止尿嘧啶掺入DNA的酶。Dut-ung双突变体在其DNA中积累了大量的尿嘧啶。
e14	是一种类似于原噬菌体的元素，存在于K-12中，但缺少许多衍生物。e14携带mcrA基因，因此e14-品系是McrA-。
endA	end1核酸酶的基因，大肠杆菌的主要内切核酸酶
F	是一种自身可传递的质粒（100 kb），赋予生成菌毛（即“雄性”）的能力，从而被雄性特异性噬菌体（如M13）感染。
F'	一种从大肠杆菌中选取一些染色体DNA的F质粒。F'可以有自己的基因型。两种流行的模型编码lacβ肽（ΔM15），或LacIQ。
hsdRSM	是限制系统，将特定序列中的宿主DNA甲基化，并切割未被这样甲基化的DNA。R基因是核酸内切酶，M基因是甲基化酶，S基因是这两种酶发挥功能所必需的酶。因此hsdR突变体不具有核酸内切酶功能，但仍然甲基化。HsdS突变体不具有内切核酸酶或甲基化酶。两种流行的模型是大肠杆菌K的K系统和大肠杆菌B的B系统。
lacIQ	过量产生 lacI 基因产物，它是 lac 操纵子的阻遏物。
lacY	乳糖通透酶。LacY突变体不能用于蓝/白筛选，但可用于调节IPTG诱导的基因表达中的基因表达。
lacZ	β-半乳糖苷酶基因。Δ(lacZ)M15突变表达β片段。这常见于F’元件或缺陷型80φ原噬菌体上。许多质粒表达α片段。两者共同形成功能性β-半乳糖苷酶。
Δlac	除了一些侧翼DNA外，还有三种常见的缺失，涉及整个lacZYA操纵子：ΔU169，ΔX111和ΔX74。
Ion	是一种负责降解异常蛋白质和关闭sulA功能的蛋白酶。大肠杆菌B天然缺乏lon。
mal B	malB区域包含基因malEFG和malK lamB malM。 Δ (malB) 删除此整个区域的大部分或全部。LamB是λ噬菌体的受体。
mcr A	它在某些序列中限制含有甲基胞嘧啶的DNA。当原噬菌体e14丢失时，McrA丢失。
mcr BC	该系统在某些序列中限制含有甲基胞嘧啶的DNA。Δ(mcrC-mrr) 删除六个基因：mcrC-mcrB-hsdS-hsdM-hsdR-mrr。
mrr	是一种甲基胞嘧啶和甲基腺嘌呤限制系统。
recA	是大多数同源重组途径所必需的。
recB	是ExoV功能所必需的。重组缺陷。
recC	是ExoV功能所必需的。
recD	是ExoV功能所必需的。RecD突变体可稳定反向重复序列，但会干扰质粒维持。
recF	是质粒间同源重组所需的重组基因。
recJ	是质粒间同源重组所需的重组基因。
rpoH	（或htpR热休克转录因子），是表达一些热休克蛋白酶所必需的。
sbcB	是外切核酸酶 I 功能所必需的。携带recB recC和sbcB的菌株通常也是sbcC。这些四重突变株有完全重组能力并在λ中繁殖反向重复序列，但质粒复制异常。
sbcC	帮助（用sbcB）抑制recBC突变体的作用。sbcC突变体是Rec+，在质粒中稳定地增殖反向重复。
supE	（或glnV），突变体 tRNA在UAG密码子处插入谷氨酰胺，抑制阅读框中的UAG突变。SupE是一些噬菌体突变体裂解生长所必需的。
supF	（或tyrT），突变体 tRNA在UAG密码子处插入酪氨酸，从而抑制UAG突变在阅读框中的作用。这种突变是一些λ噬菌体（如λgt11）裂解生长所必需的。
traD	缀合F质粒的缺陷突变体。
ung	是尿嘧啶N-糖基化酶中的突变体，尿嘧啶N-糖基化酶是一种从DNA中去除尿嘧啶的酶。ung突变体使尿嘧啶在DNA中持续存在。
φ80dlacΔM15	对Φ80的一种有缺陷的原噬菌体衍生物具有溶原性。lacZ ΔM15等位基因为蓝白筛选提供β肽。