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Merck
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文件

MAB305

Sigma-Aldrich

抗胆碱乙酰转移酶抗体,克隆1E6

ascites fluid, clone 1E6, Chemicon®

别名:

ChAT, Choline Acetylase, CHOACTase

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About This Item

分類程式碼代碼:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41

生物源

mouse

品質等級

抗體表格

ascites fluid

抗體產品種類

primary antibodies

無性繁殖

1E6, monoclonal

物種活性

human, rat, monkey

製造商/商標名

Chemicon®

技術

immunohistochemistry: suitable

同型

IgG1

UniProt登錄號

運輸包裝

dry ice

目標翻譯後修改

unmodified

基因資訊

human ... CHAT(1103)
rat ... Chat(290567)
rhesus monkey ... Chat(709977)

特異性

识别大脑和脊髓(CNS)中的胆碱能神经元。

免疫原

从大鼠脑中纯化的胆碱乙酰基转移酶。

應用

使用经验证可用于IH的抗胆碱乙酰基转移酶抗体,克隆1E6检测胆碱乙酰基转移酶。
免疫组化:1:100-1:250。参见下面的免疫组化程序。

最佳工作稀释度必须由最终用户进行确定。

MAB305,胆碱乙酰基转移酶的单克隆抗体的免疫组化程序(PAP技术)

I)灌注&切片程序

1.用含4%多聚甲醛的0.12 M磷酸盐缓冲液(pH值7.3)的固定液灌注心脏,用于光学显微镜检查(LM),此外,0.1%戊二醛和0.002%CaCl2用于电子显微镜检查(EM)。

2.取出大脑,并在4°C下于0.12 M磷酸盐缓冲液中的4%多聚甲醛中后缀2-18小时。

3.脑部封闭切片后,在数次更换的缓冲液中洗涤2-3小时。

4.将用于EM的标本在振动切片机(50 μm)上切片,并在缓冲液中冲洗,用于LM的标本应在缓冲液中的30%蔗糖中冷冻保护。

5.用干冰冷冻后,在低温恒温器上切下30-40 μm厚的LM标本切片。

6.冲洗切片,然后保存在含有0.1%叠氮化钠的磷酸盐缓冲液中。

II)染色程序

将组织在连续激搅拌的溶液中作为自由漂浮的切片进行处理。 除非另有说明,否则在室温下进行全部培养。

1.a.对于ChAT阳性体细胞和树突的定位:

仅在0.1 M Tris缓冲盐水(TBS;含1.4%NaCl,pH值7.3)中洗涤切片。 不使用去污剂或酶预处理。

b. 对于定位ChAT阳性末端样结构:

在TBS(pH值8.1)中于37°C培养切片5分钟。 将切片转移到含有链霉蛋白酶(1.2 μg/ml)的TBS(pH值8.1)中,在37°C下放置1 1/2-2分钟,然后用冰冷缓冲液洗涤几次,总共5分钟。 应评估每个检查区域的链霉蛋白酶浓度和消化培养时间。

c. 用于定位ChAT免疫反应性并随后对切片进行复染:

在含有0.1%-0.8%Triton X-100的TBS中培养15分钟可能会增加免疫试剂的组织渗透性,但也会增加背景染色。

2.将切片在正常山羊血清(3-5%)中培养1小时。 全部抗血清的工作溶液也应含有类似稀释的正常山羊血清。

3.在抗ChAT单克隆抗体溶液(建议的工作稀释度为1:250,最终工作稀释度必须由最终用户确定)中于室温下培养2小时,然后在4°C下再培养6-18小时。

4.培养用第二抗体(即山羊抗小鼠IgG,目录号AP124,稀释度1:50-100)进行1-2小时。

5.培养用稀释的PAP复合物(即小鼠PAP,目录号PAP14,浓度μ25-50 g/ml)进行1小时。

6.在缓冲液中漂洗后,每次40分钟至1小时重复第二抗体和PAP步骤,以放大染色强度,特别是小的含ChAT结构的染色强度。

7.与0.06%3,3′-二氨基联苯胺×4 HCl(DAB;用磷酸盐缓冲盐水,pH值7.3稀释)和0.006%H2O2反应15分钟。

8.常规LM的标本在0.005%OsO4(四氧化锇)中后固定1分钟,然后安装,脱水并盖玻片。 将被EM封闭的选定区域在2%OsO4中后固定1小时,用乙酸铀酰整体染色,然后平包埋在Epon-Araldite树脂中。
研究子类别
神经递质 & 受体

神经元 & 胶质标记
研究类别
神经科学

外觀

不含防腐剂的腹水。
未纯化

儲存和穩定性

自发运之日起在-20°C可保存1年。等分以避免反复冻融。为了最大程度地回收产品,在融化后和取下盖子之前,将原始样品瓶进行离心。

分析報告

对照
脑组织

其他說明

浓度:请参考批次特异性浓缩物的分析证书。

法律資訊

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

免責聲明

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儲存類別代碼

10 - Combustible liquids

水污染物質分類(WGK)

WGK 1

閃點(°F)

Not applicable

閃點(°C)

Not applicable


分析证书(COA)

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