Production de vaccins à ARNm

Optimiser la production d'ADN plasmidique

Du fait du rôle central de la matrice d'ADN dans la production de vaccins à ARNm, le design et la pureté de la matrice sont des facteurs importants pour l'optimisation de l'ARNm produit. Différentes technologies peuvent être employées. La méthode traditionnelle repose sur l'amplification de l'ADN plasmidique dans des cellules bactériennes ; les étapes de purification qui s'ensuivent doivent être conçues de façon à donner un ADNp circulaire pur et concentré, qui est ensuite linéarisé. Notre technologie distincte de génération de matrice d'ADN, basée sur l'amplification en chaîne par polymérase (PCR), s'est démarquée d'autres technologies de fabrication d'ARNm grâce à certains avantages.

Maximiser la quantité d'ARNm récupéré

La pureté de l'ARNm est un élément déterminant pour le rendement et l'efficacité. L'élimination des impuretés réduit les réponses immunitaires innées et permet d'atteindre des niveaux d'expression bien supérieurs pour les protéines rapporteurs. Après transcription in vitro, les impuretés issues des produits et du procédé de fabrication doivent être retirées. Il peut s'agir notamment d'endotoxines, d'ARN double brin immunogène (ARNdb), de matrices d'ADN résiduelles, d'ARN polymérase, d'hybrides d'ARN-ADN, de structures d'ARN secondaires (contaminants en épingle à cheveux), ou d'impuretés élémentaires. Ces impuretés peuvent induire de fortes réactions inflammatoires et des effets secondaires ; elles doivent donc être étroitement contrôlées avant la libération du produit. 

Obtenir un ARNm de pureté adéquate 

La purification de l'ARNm peut être assurée de différentes manières : filtration à flux tangentiel (TFF), appariement d'ions en phase inverse, échange d'anions (AEX), chromatographie hydrophobe (HIC) et chromatographie d'affinité avec capture par poly(dT). Les étapes chromatographiques sont suivies d'une concentration et d'une diafiltration finales servant à maximiser la pureté et à transférer l'ARNm dans le tampon de formulation ou de stockage approprié.

Optimiser l'administration du vaccin 

L'ARNm purifié doit être intégré dans la particule qui servira de vecteur d'administration. Les nanoparticules lipidiques (NPL) sont couramment employées dans ce sens ; elles permettent aussi de protéger l'ARNm de la dégradation. Les lipides doivent être choisis en fonction de la voie d'administration souhaitée, pour atteindre une efficacité maximale et une biodistribution optimale. Les autres aspects à prendre en compte lors du choix des lipides sont le type des lipides, leur origine et leur qualité.

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