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Purificación FLAG®

Un primer plano de un entorno de laboratorio. El foco principal es una pipeta azul que dispensa una gota en un pequeño recipiente de vidrio parcialmente lleno de un líquido de color rosa. El fondo, aunque borroso, sugiere la presencia des otros varios instrumentos o recipientes de laboratorio.

Las etiquetas FLAG® permiten una detección superior y una purificación sólida de proteínas de fusión recombinantes, con una utilidad probada en numerosas aplicaciones posteriores, desde ensayos de unión y actividad hasta análisis estructurales. La etiqueta epítopo FLAG® es un péptido corto de ocho aminoácidos hidrófilo (etiqueta DYKDDDDDK) que es fácilmente escindible por la enterocinasa (EK). Debido a su pequeño tamaño y su naturaleza hidrófila, la etiqueta FLAG® reside normalmente en la superficie de la proteína de fusión, lo que minimiza los efectos sobre la función, la secreción o el transporte de la proteína de fusión. Con independencia de cuál sea su aplicación final, tenemos las herramientas necesarias para expresar, purificar y detectar proteínas de fusión FLAG® . 

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F1804
ANTI-FLAG® M2 monoclonal antibody produced in mouse
1 mg/mL, clone M2, affinity isolated antibody, buffered aqueous solution (50% glycerol, 10 mM sodium phosphate, and 150 mM NaCl, pH 7.4)
A2220
Gel ANTI-FLAG® M2 Affinity
purified immunoglobulin, buffered aqueous glycerol solution
M8823
Microesferas magnéticas anti-FLAG® M2
affinity isolated antibody
F3165
ANTI-FLAG® M2 monoclonal antibody produced in mouse
clone M2, purified immunoglobulin (Purified IgG1 subclass), buffered aqueous solution (10 mM sodium phosphate, 150 mM NaCl, pH 7.4, containing 0.02% sodium azide)
F4799
3xFLAG™ Peptide
≥90% (HPLC/MS), lyophilized powder
A8592
ANTI-FLAG® M2-Peroxidasa (HRP) monoclonal antibody produced in mouse
clone M2, purified immunoglobulin, buffered aqueous glycerol solution
F7425
ANTI-FLAG® antibody produced in rabbit
affinity isolated antibody, buffered aqueous solution
F3290
FLAG® Peptide
≥85% (HPLC), lyophilized powder
F4049
ANTI-FLAG® M2 monoclonal antibody produced in mouse
clone M2, purified immunoglobulin, buffered aqueous solution
F2426
ANTI-FLAG® M2 monoclonal antibody produced in mouse
clone M2
A4596
ANTI-FLAG® M1 Agarose Affinity Gel
F9291
ANTI-FLAG® M2 monoclonal antibody produced in mouse
clone M2, purified immunoglobulin, buffered aqueous glycerol solution
B3111
ANTI-FLAG® M2 antibody, Mouse monoclonal
Clone M2, purified from hybridoma cell culture in bioreactor
F3040
Monoclonal ANTI-FLAG® M1 antibody
clone M1, purified immunoglobulin, buffered aqueous solution
FLAGIPT1
FLAG® Immunoprecipitation Kit
P2983
ANTI-FLAG® M2 monoclonal antibody produced in mouse
96-well, clear, polystyrene, flat bottom plate
F2555
Rabbit Monoclonal ANTI-FLAG® Clone SIGI-25
clone SIG1-25, ascites fluid
P7582
Amino-terminal FLAG-BAP™ Fusion Protein
SAB4200071
ANTI-FLAG® antibody, Rat monoclonal
clone 6F7, purified from hybridoma cell culture
CELLMM2
FLAG® M Purification Kit
For Mammalian expression systems.
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Representación gráfica con un patrón de círculos y líneas morados interconectados sobre un fondo amarillo. El diseño recuerda una estructura molecular simplificada o a un diagrama de red, lo que sugiere temas de interconectividad o relaciones.

Expresión de la proteína etiqueta FLAG®

Nuestra cartera de productos de expresión de las proteínas etiquetas FLAG® consta de vectores para la expresión eficiente de proteínas de fusión recombinantes en sistemas bacterianos y de mamífero. La tecnología de vectores SnapFast™ le permite mover fácilmente el gen de interés de un vector a otro para una clonación más eficiente y rentable.

  • El péptido FLAG® estándar (secuencia: DYKDDDDK) es una etiqueta pequeña que puede incorporarse con un riesgo mínimo de impedimento estérico o de impacto negativo en la solubilidad de las proteínas
  • La secuencia de la etiqueta 3xFLAG® fusiona tres epítopos FLAG® en tándem para una mejor detección (hasta 200X) de las proteínas de fusión
un fondo amarillo vibrante con un cuadrado morado en el centro que tiene esquinas redondeadas. Dentro del cuadrado, hay un diseño simétrico con tres flechas horizontales: una en la parte superior que apunta hacia la izquierda y la derecha, una en el centro que apunta hacia ambos lados desde el centro, y otra en la parte inferior que refleja la flecha superior. Una línea vertical baja de la flecha superior a la inferior a través de sus puntos de simetría. Esparcidos alrededor de estas flechas hay formas geométricas: círculos y diamantes o rombos.

Purificación de la proteína etiqueta FLAG®

Ofrecemos una variedad de geles de purificación por afinidad de agarosa, microesferas magnéticas, kits de purificación y placas recubiertas para el aislamiento y la purificación de proteínas etiquetadas con FLAG®.

  • Los geles de afinidad de agarosa permiten la purificación de proteínas de fusión etiquetadas utilizando anticuerpos anti-FLAG® reticulados con agarosa granulada, y son adecuados para la purificación a pequeña o gran escala; estas resinas son adecuadas para purificación en columna de flujo por gravedad.
  • Las microesferas magnéticas anti-FLAG®M2 se utilizan para purificar proteínas recombinantes de fusión etiquetadas utilizando una gradilla o plataforma magnética para separar las microesferas y aislar la proteína para un procesamiento rápido.
  • Las placas de 96 pocillos recubiertas con anti-FLAG®de gran sensibilidad M2 son adecuadas para el cribado de expresión, el estudio de interacciones proteína-proteína y los ensayos ELISA.
Arte lineal de color morado sobre un fondo amarillo, que se asemeja a una representación abstracta de la letra “K.” El diseño es simple con líneas limpias y sin adornos o texturas añadidas.

Detección de la etiqueta FLAG®

Las etiquetas FLAG® y 3xFLAG™ incluyen sitios de unión para anticuerpos monoclonales anti-FLAG® muy específicos, así como anticuerpos policlonales y conjugados para ELISA, aplicaciones de transferencia, inmunofluorescencia, inmunocitoquímica, inmunohistoquímica (IHC), transferencia y citometría de flujo.

  • El anticuerpo M2 anti-FLAG® se une a las proteínas de fusión N-terminal FLAG®, C-terminal FLAG®y Met-FLAG®.
  • La unión del anticuerpo M1 anti-FLAG®depende del calcio y es específica para el N-terminal de la etiqueta FLAG®.
  • El anticuerpo M5 anti-FLAG® se une a las proteínas de fusión N-terminal FLAG® y Met-FLAG®.
 Anticuerpo monoclonal anti-FLAG® M1 producido en ratónAnticuerpo monoclonal anti-FLAG® M2
producido en ratón		Anticuerpo monoclonal anti-FLAG® M5 producido en ratón
ReferenciaF3040F1804F3165F4042
ClonM1M2M2M5
Secuencia del inmunógenoDYKDDDDKDYKDDDDKDYKDDDDKDYKDDDDK
Método de purificación del anticuerpoPurificado en proteína A sefarosaPurificado en péptido-agarosa FLAG® patentadoPurificado en proteína A sefarosaPurificado en proteína A sefarosa
KD53,4 nM9,3 nM9,3 nMNo disponible
EspecificidadGran especificidad. Reconoce el epítopo FLAG® sólo cuando se encuentra en el N-terminal libre.Reconoce la secuencia FLAG® en N-terminal, Met-N-terminal,
C-terminal o en cualquier sitio interno de la proteína de fusión FLAG®.		Fuerte reconocimiento de la proteína de fusión Met-N FLAG®. Débil unión con la proteína de fusión N o C-terminal.
SensibilidadDetecta 1 ng de proteína de fusión FLAG-BAP™ en un inmunoanálisis por puntosDetecta 2 ng de proteína en un inmunoanálisis por puntosDetecta <1 ng de proteína de fusión Met-FLAG® en un inmunoanálisis por puntos
Recomendado para:Recomendado para la detección de proteínas de fusión FLAG® en mamíferos, plantas y sistemas de expresión bacterianos. Muy útil para la purificación por afinidad. No se recomienda para la detección de proteínas expresadas en el citoplasma.Detección mediante inmunoelectrotransferencia (Western blot) de proteínas diana expresadas en E. coli,
lisado crudo de células
vegetales o de mamífero.		Detección mediante inmunoelectrotransferencia de proteínas diana expresadas en lisado de células de mamíferos y de drosophila. Particularmente útil para la detección de proteínas de fusión Met-FLAG expresadas en el citoplasma. No se recomienda para la detección de proteínas de fusión expresadas en E. coli
Aplicaciones*IP, IC, WB, EIAIP, IC, WB, EIAIP, IC, WB, EIAWB
Requisitos especialesLa unión requiere calcio. (El complejo se disociará en ausencia de iones de calcio)N/AN/AN/A
*IP=inmunoprecipitación; IC=inmunoquímica, WB=inmunoelectrotransferencia, EIA=enzimoinmunoanálisis de absorción (ELISA)

Anticuerpo y características de unión

ANTI-FLAG M1

Ratón
AcM IgG2b

ANTI-FLAG M2

Ratón
AcM IgG1

ANTI-FLAG
M5

Ratón
AcM IgG1

Proteína de fusión N-terminal FLAG no procesada:
Péptido señal - FLAG - Proteína		-+Sin determinar
Proteína de fusión Met-N-terminal FLAG:
Proteína Met - FLAG		-+++
Proteína de fusión N-terminal FLAG:
FLAG - Proteína		++Débil
Péptido FLAG interno:
Proteína - FLAG - Proteína		-+Sin determinar
Proteína de fusión C-terminal FLAG:
Proteína - FLAG		-+Débil
Unión dependiente del calcio
(el complejo se disocia en tampón que contiene EDTA)		+--

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