MABN821

Anti-PolyQ-Krankheitsproteine-Antikörper, Klon 3B5H10

clone 3B5H10, from mouse

• Synonym(e): Huntingtin mutants with expanded polyQ repeats, HD protein, Huntington disease protein, mHtt, PolyQ disease proteins
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.43

Eigenschaften

• Biologische Quelle: mouse
• Qualitätsniveau: 100
• Antikörperform: purified antibody
• Antikörper-Produkttyp: primary antibodies
• Klon: 3B5H10, monoclonal
• Speziesreaktivität: human
• Methode(n): electron microscopy: suitable; immunocytochemistry: suitable; immunohistochemistry: suitable; inhibition assay: suitable; western blot: suitable
• Isotyp: IgG1
• UniProt-Hinterlegungsnummer: P42858
• Versandbedingung: ambient
• Posttranslationale Modifikation Target: unmodified
• Angaben zum Gen: human ... HTT(3064)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Huntingtin (UniProt P42858; auch bekannt als HD-Protein, Huntington-Krankheit-Protein) wird beim Menschen durch das HTT-Gen (auch bekannt als HD, IT15) (Gen-ID 3064) kodiert. Fehlfaltung und Selbstaggregation spezifischer Proteine sind ein häufiges Merkmal bekannter neurodegenerativer Erkrankungen, darunter die Huntington-Krankheit (HD), die Alzheimer-Krankheit (AD), die Parkinson-Krankheit (PD) und die Amyotrophe Lateralsklerose (AML). Abnormale Polyglutamin(PolyQ)-Wiederholungssequenzen oder -abschnitte führen zu Proteinfehlfaltungen und Neurodegeneration. Die Huntington-Krankheit wird beispielsweise durch die PolyQ-Expansion in der ersten exonkodierten Sequenz des kausalen Proteins Huntingtin (Htt-Exon-1) verursacht. Das expandierte PolyQ führt zur Bildung von fibrillären Aggregaten, die reich an Beta-Faltblättern sind und Amyloid genannt werden. Acht Proteine, die PolyQ-Trakte enthalten, aber ansonsten nichts mit Htt zu tun haben, führen bei PolyQ-Expansion ebenfalls zu Proteinfehlfaltungen und Neurodegeneration. Es gibt immer mehr Hinweise darauf, dass lösliche Oligomere oder sogar Monomere der krankheitsverursachenden Amyloidproteine die toxischeren Spezies sind. Bei der Huntington-Krankheit wird angenommen, dass die Bildung der sehr großen aggregierten Spezies des mutierten Htt (mHtt) im Endstadium, die als Einschlusskörper (IBs) bezeichnet werden, eine Bewältigungsreaktion ist, um toxische Spezies von monomerem oder kleinem oligomerem mHtt abzusondern, die diffus im Neuron verteilt sind.

Spezifität

Das Ziel-Epitop des Klons 3B5H10 ist in einigen der vielen Konformationen, die monomere und möglicherweise kleine oligomere polyQ-Spezies des mutierten Huntingtin-Proteins (mHtt) annehmen, exponiert, verschwindet aber in aggregierten Formen mit höherem Molekulargewicht, wie z. B. in Einschlusskörpern (IBs). Das Epitop kommt auch in mutierten Formen anderer polyQ-haltiger Proteine vor, die Neurodegeneration verursachen, darunter der Androgenrezeptor, Atrophin und Ataxin-3 (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Immunogen

N-terminales GST-markiertes menschliches Huntingtin(Htt)-Fragment, das der Exon-1-kodierten Sequenz entspricht, die einen Abschnitt von 66 Glutaminen enthält (GST-171-Q66; Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Anwendung

Analyse mittels Elektronenmikroskopie: Eine repräsentative Charge wies transient exprimiertes N-terminales Huntington(Htt)-Fragment mit 97 PolyQ-Expansionen in transfizierten Neuronen mittels Immunfärbung nach. Klon 3B5H10 markierte diffuses Htt im Zytoplasma mit geringer Färbung von Htt in Organellen und keiner Färbung von Htt in großen Einschlusskörpern (IBs) (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Immunzytochemische Analyse: Eine repräsentative Charge färbte Neuronen, die transient Huntington (Htt) oder Ataxin-3 mit krankheitsassoziierten polyQ-Expansionen (Q46 bis Q138) exprimieren, mittels Immunfärbung, nicht aber Neuronen, die Htt mit Q17 oder Ataxin-3 mit Q27 exprimieren. Der Klon 3B5H10 färbte zwar diffuses mutiertes Htt (mHtt), aber kein aggregiertes Htt in großen Einschlusskörpern (IBs) (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Immunhistochemische Analyse: Eine repräsentative Charge färbte Hirngewebeschnitte von transgenen Mäusen, die krankheitsassoziierte humane mutierte Huntington-Proteine​(mHtt) exprimieren, mittels Immunfärbung, einschließlich der Mausstämme BACHD (mHtt in voller Länge mit Q97), R6/2 (Exon-1-Fragment mit ~Q150) und YAC-SCA3 (mHtt in voller Länge mit Q84). Klon 3B5H10 färbte diffuses mHtt, konnte jedoch Gewebe mit stark aggregiertem Htt nur färben, wenn eine starke Antigenrückgewinnung durch Behandlung mit 90%iger Ameisensäure durchgeführt wurde (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Inhibitionsanalyse: Untersuchungen mit Rasterkraftmikroskopie (AFM) und dynamischer Lichtstreuungsmessung (DLS) zeigten, dass eine repräsentative Charge in vitro die Aggregation des mutierten Htt(mHtt)-Exon-1-Fragments mit Q39 oder Q53 verhinderte und voraggregierte mHtt-Oligomere und -Fibrillen in Monomere aufbrach (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Western-Blot-Analyse: Mit einer repräsentativen Charge wurden Huntington- (Htt), Androgenrezeptor- (AR) und Atrophinkonstrukte mit krankheitsassoziierten PolyQ-Expansionen (Q65 bis Q103) nachgewiesen, jedoch keine Konstrukte mit Q19 oder Q25, die exogen in HEK293- und PC12-Zellen exprimiert wurden. Klon 3B5H10 wies monomere und möglicherweise kleine oligomere N-terminale mHtt-Fragmente nach, jedoch keine großen Oligomere oder Aggregate mit hohem Molekulargewicht (Miller, J., et al. (2011). Nat. Chem. Biol. 7(12):925-934).

Der Anti-polyQ-Krankheitsproteine-Antikörper, Klon 3B5H10, Art.-Nr. MABN821 ist ein hochspezifischer monoklonaler Maus-Antikörper, der gegen krankheitsassoziierte PolyQ-Proteine gerichtet ist und in Elektronenmikroskopie, Immunzytochemie, Immunhistochemie, Inhibitionsstudien und Western Blot getestet wurde.

Qualität

Beurteilt mittels Western Blot von rekombinanten 134Q-mtHTT- und 17Q-wtHTT-Fragmenten.

Western-Blot-Analyse: 0,5 µg/ml dieses Antikörpers wiesen das durch Exon 1 kodierte N-terminale Huntington-Fragment mit 134-Glutamin/Gln(134Q)-Expansion nach, nicht aber das entsprechende normale (Wildtyp-)Fragment mit 17Qs.

Zielbeschreibung

Variabel je nach Anzahl der PolyQ. Die polyQ-Region des Huntingtin-Proteins (Htt) ist hochgradig polymorph und kann von 10 bis 35 Wiederholungen in der Normalbevölkerung bis auf 120 oder mehr Wiederholungen bei Patienten mit Huntington-Krankheit ausgedehnt werden. 347,6 kDa, berechnet auf der Grundlage der von UniProt P42858 gemeldeten Sequenz.

Physikalische Form

Format: Aufgereinigt

Sonstige Hinweise

Konzentration: Die Konzentration entnehmen Sie bitte dem chargenspezifischen Datenblatt.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1