Ultrafiltrace proteinových vzorků

• Co je to ultrafiltrace?
• Ultrafiltrace vs dialýza
• Ultrafiltrace vs mikrofiltrační membrány
• Jak používat ultrafiltraci v laboratoři?

Co je to ultrafiltrace?

Ultrafiltrace (UF) je proces separace extrémně malých částic a rozpuštěných molekul z kapalin. Primárním základem separace je velikost molekul, ačkoli propustnost filtru může být ovlivněna chemickými, molekulárními nebo elektrostatickými vlastnostmi vzorku. Aby mohly být molekuly ultrafiltrací odděleny, musí se lišit velikostí nejméně o řád a mít molekulovou hmotnost mezi 1 kDa až 1000 kDa. Ultrafiltrační membrány lze použít buď k čištění filtrátu (roztok prošlý filtrem), nebo ke sběru retentátu (materiál zadržený filtrem).

Ultrafiltrace se obvykle používá k:

• Oddělit proteiny od složek pufru pro výměnu pufru, odsolení nebo zkoncentrování
• Odstranit nebo vyměnit cukry
• Odstranit nebo vyměnit nevodná rozpouštědla
/li>
• Oddělit volné ligandy a ligandy vázané na bílkoviny
• Odstranit materiály s nízkou molekulovou hmotností
• Rychle změnit iontové a/nebo pH prostředí

Dialýza vs. ultrafiltrace

Dialýza je separace částic a rozpuštěných molekul z kapalin na základě jejich schopnosti procházet membránou. Podobně jako ultrafiltrace se dialýza používá k oddělení produktů podle molekulové hmotnosti. Ultrafiltraci i dialýzu lze použít k čištění, výměně rozpouštědel a odsolování, ale každá metoda má pro určité aplikace své výhody. Stáhněte si naši infografiku o ultrafiltraci a dozvíte se více o výhodách dialýzy a ultrafiltrace.

Dialýza se obvykle používá, když:	Ultrafiltrace se obvykle používá, když:
Vzorky se srážejí při vysokých koncentracích	Vzorky se při vysoké koncentraci nesrážejí
Potřebná pomalá výměna rozpouštědla	Je nutná rychlá výměna rozpouštědla
Vzorky ne'nevyžadují koncentraci	Vzorky je třeba zpracovávat při nízkých teplotách

Ultrafiltrační vs. mikrofiltrační membrány

Ultrafiltrační membrány, včetně membrán Ultracel<...sup>® regenerované celulózové membrány, jsou membrány, které mají dvě odlišné vrstvy (obrázek 1):

• a thin (0.1-1,5 µm), hustá slupka s průměrem pórů 10-400 angströmů
• vysoce porézní substruktura

Na rozdíl od porézní substruktury umožňuje hustá slupka na bázi celulózy díky vysoce kontrolované a přesné velikosti pórů přesné oddělování molekulových hmotností (MWCO). Pokud částice nedosahují MWCO a jsou schopny projít hustou vrstvou slupky, mohou pak volně procházet porézní membránou.

Mikropórové membrány jsou tuhé, souvislé sítě z polymerního materiálu s definovanou velikostí pórů a používají se k zadržování bakterií, koloidů a částic (obr. 2). Částice jsou buď zadržovány na povrchu membrány, nebo jsou zachycovány v její spodní struktuře (hloubkový filtr).

Obrázek 1. Průřez ultrafiltrační membránou se slupkou a porézní strukturou

Obrázek 2. Průřez tradiční mikroporézní membrány s rovnoměrnou strukturou pórů shora dolů

Jak používat ultrafiltraci ve vaší laboratoři

Nabízíme celou řadu ultrafiltračních membrán a zařízení, abychom zajistili splnění potřeb vaší konkrétní aplikace. Na základě obecných kritérií použití a vlastností vzorků sestavili naši vědci tabulku, která vám navrhne, který produkt Amicon^® by byl pro vaši aplikaci pravděpodobně nejvhodnější. Pomocí níže uvedených odkazů se dozvíte více o schopnostech jednotlivých našich ultrafiltračních produktů.

Kritéria použití a vlastnosti vzorku	Doporučení ultrafiltračního přípravku
Zpracování malých objemů vzorků (0.5 -15 ml) Vzorek schopný vydržet odstředění	Amicon® ultracentrifugální filtry
Centricon® Plus-70 odstředivé filtry
Zpracování velmi velkoobjemových vzorků (70-400 ml) Centrifugace je pro vzorek příliš náročná	Amicon® míchané buňky
Vysoce výkonná příprava vzorků Zpracování velmi malých objemů vzorků (50-500 μl)	MultiScreen® filtrační destičky s Ultracel®.-10 membránami
Oddělení volných bílkovin od vázaných v klinických vzorcích (např.g., sérum, plazma)	Centrifree® ultrafiltrační zařízení

Stále si nejste jisti, jak by se ultrafiltrace dala využít ve vaší laboratoři? Podívejte se na naše ultrafiltrační protokoly pro přípravu proteinových vzorků a zjistěte, jak byste mohli urychlit a zlepšit přípravu svých vzorků.