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  • Evaluation of the sensitivity, responsiveness and reproducibility of primary rainbow trout hepatocyte vitellogenin expression as a screening assay for estrogen mimics.

Evaluation of the sensitivity, responsiveness and reproducibility of primary rainbow trout hepatocyte vitellogenin expression as a screening assay for estrogen mimics.

Aquatic toxicology (Amsterdam, Netherlands) (2015-01-07)
Maria T Hultman, Jan Thomas Rundberget, Knut Erik Tollefsen
ABSTRACT

Vitellogenin (Vtg) induction in primary fish hepatocytes has been proposed as an in vitro screening assay for ER agonists and antagonists, but has not yet been used extensively as a high-throughput screening tool due to poor reproducibility, sensitivity and overall feasibility. The present work has evaluated the role of seasonal variation, normalization, optimal culture and assay conditions on the sensitivity, responsiveness and reproducibility of in vitro vtg gene mRNA and protein expression in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) primary hepatocytes using the xenoestrogen 17α-ethynylestradiol (EE2) as a test chemical. The results show that primary hepatocytes display a relatively high individual and seasonal variation in both Vtg mRNA and protein induction potential, although less variance was observed in assay sensitivity. Data normalization of assay response to maximum (3 nM EE2) and minimum (DMSO) Vtg production dramatically reduced this variance and led to improved assay reproducibility. A time-dependent response was observed both for mRNA and protein expression, reaching maximum Vtg induction after 96 h of exposure, although reproducible concentration response curves for both Vtg mRNA and protein could be obtained already after 48 h. A need for chemical re-exposure of the hepatocytes was identified to be important for sustaining exposure concentrations in extended studies (>48 h), whereas different plate formats (96, 24 or 6 wells) did not affect the bioassay performance. In conclusion, standardization of hepatocyte bioassay and test conditions as well as data-normalization procedures are proposed to be instrumental for more consistent and comparable results in future use of this in vitro assay.

MATERIALI
N° Catalogo
Marchio
Descrizione del prodotto

Sigma-Aldrich
Metanolo, suitable for HPLC, ≥99.9%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Acetone, ACS reagent, ≥99.5%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Metanolo, ACS reagent, ≥99.8%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Acetone, suitable for HPLC, ≥99.9%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Metanolo, suitable for HPLC, gradient grade, ≥99.9%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Acetone, HPLC Plus, for HPLC, GC, and residue analysis, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
Toluene, ACS reagent, ≥99.5%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Bicarbonato di sodio, ACS reagent, ≥99.7%
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Sigma-Aldrich
Metanolo, HPLC Plus, ≥99.9%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Carbonato di sodio, powder, ≥99.5%, ACS reagent
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Toluene, suitable for HPLC, 99.9%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Toluene, HPLC Plus, for HPLC, GC, and residue analysis, ≥99.9%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Bicarbonato di sodio, powder, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture
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Sigma-Aldrich
Acetone, Laboratory Reagent, ≥99.5%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Ammonio acetato, ACS reagent, ≥97%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Carbonato di sodio, ACS reagent, anhydrous, ≥99.5%, powder or granules
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Bicarbonato di sodio, ReagentPlus®, ≥99.5%, powder
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Ammonio acetato, ≥99.99% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Copper(II) sulfate, ReagentPlus®, ≥99%
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Sigma-Aldrich
Metanolo, suitable for HPLC, gradient grade, suitable as ACS-grade LC reagent, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
Metanolo, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.8% (GC)
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Sigma-Aldrich
Toluene, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.7% (GC)
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Acetone, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., ≥99.5% (GC)
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Carbonato di sodio, ACS reagent (primary standard), anhydrous, 99.95-100.05% dry basis
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Metanolo, Laboratory Reagent, ≥99.6%
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Sigma-Aldrich
Dansyl chloride, BioReagent, suitable for amino acid labeling, powder and chunks, ≥99% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Bicarbonato di sodio, anhydrous, free-flowing, Redi-Dri, ACS reagent, ≥99.7%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Carbonato di sodio, ReagentPlus®, ≥99.5%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Acetone, suitable for HPLC, ≥99.8%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili
Sigma-Aldrich
Ammonio acetato, for molecular biology, ≥98%
Prezzi e disponibilità al momento non sono disponibili