11684795910
Roche
Kit per la rilevazione della morte cellulare in situ, fluoresceina
sufficient for ≤50 tests, suitable for detection
Sinonimo/i:
′, Fluorescein-12-UTP tetralithium salt
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About This Item
Codice UNSPSC:
12352200
Prodotti consigliati
impiego
sufficient for ≤50 tests
Livello qualitativo
Produttore/marchio commerciale
Roche
tecniche
flow cytometry: suitable
applicazioni
detection
Temperatura di conservazione
−20°C
Descrizione generale
I metodi ampiamente usati per determinare l'apoptosi comprendono l'analisi del DNA genomico mediante elettroforesi su gel di agarosio e saggi di frammentazione del DNA basati su 3H-timidina e, in alternativa, 5-bromo-2′-desossiuridina. Tali metodi prevedono la separazione, in una data popolazione cellulare, del DNA frammentato a basso peso molecolare dal DNA non frammentato ad alto peso molecolare. Pertanto, non forniscono informazioni sul destino di una singola cellula in una data popolazione cellulare, o in particolare, nelle sezioni di tessuto. In alternativa, si possono riconoscere le singole cellule apoptotiche al microscopio in base alla caratteristica condensazione e frammentazione della cromatina nucleare; questo metodo è però soggettivo e limitato a una finestra temporale relativamente stretta nella quale i cambiamenti morfologici sono massimi.
Il segno distintivo dell'apoptosi è la degradazione del DNA che, nelle prime fasi, riguarda il DNA connettivo internucleosomale. La frammentazione del DNA può produrre rotture sia a doppio che a singolo filamento (nick). Entrambi i tipi di rottura possono essere rilevati marcando i terminali 3′-OH liberi con nucleotidi modificati (ad es. biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceina-dUTP) in una reazione enzimatica. L′enzima desossinucleotidil transferasi terminale (TdT) catalizza la polimerizzazione, indipendente dal DNA stampo, dei desossiribonucleotidi all'estremità 3′ del DNA sia a singolo che a doppio filamento. Questo metodo è stato anche definito TUNEL (TdT-mediated dUTP-X nick end labeling), cioé marcatura delle estremità mediata da desossinucleotidil trasferasi terminale. In alternativa, gruppi 3′-OH liberi possono essere marcati usando una DNA polimerasi mediante un meccanismo detto Nick translation. Tale meccanismo riproduce la sequenza originale del DNA stampo. Tuttavia, il metodo TUNEL è considerato più sensibile e più veloce.
Il segno distintivo dell'apoptosi è la degradazione del DNA che, nelle prime fasi, riguarda il DNA connettivo internucleosomale. La frammentazione del DNA può produrre rotture sia a doppio che a singolo filamento (nick). Entrambi i tipi di rottura possono essere rilevati marcando i terminali 3′-OH liberi con nucleotidi modificati (ad es. biotina-dUTP, DIG-dUTP, fluoresceina-dUTP) in una reazione enzimatica. L′enzima desossinucleotidil transferasi terminale (TdT) catalizza la polimerizzazione, indipendente dal DNA stampo, dei desossiribonucleotidi all'estremità 3′ del DNA sia a singolo che a doppio filamento. Questo metodo è stato anche definito TUNEL (TdT-mediated dUTP-X nick end labeling), cioé marcatura delle estremità mediata da desossinucleotidil trasferasi terminale. In alternativa, gruppi 3′-OH liberi possono essere marcati usando una DNA polimerasi mediante un meccanismo detto Nick translation. Tale meccanismo riproduce la sequenza originale del DNA stampo. Tuttavia, il metodo TUNEL è considerato più sensibile e più veloce.
Kit per il rilevamento e la quantificazione dell'apoptosi a livello di singola cellula, basato sulla marcatura delle rotture del filamento di DNA (tecnologia TUNEL); analisi mediante microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Specificità
La reazione TUNEL marca preferenzialmente le rotture del filamento di DNA che si generano durante il processo di apoptosi. Ciò consente di distinguere l′apoptosi dalla necrosi e dalle rotture del filamento di DNA indotte mediante sostanze citostatiche o irradiazione.
Applicazioni
Il kit per la rilevazione della morte cellulare in situ con fluoresceina, utilizza una tecnica non radioattiva precisa, veloce e semplice per identificare nelle cellule e nei tessuti la morte cellulare apoptotica sia a livello di singola cellula mediante microscopia a fluorescenza, sia da un punto di vista quantitativo mediante citometria a flusso. Pertanto, il kit per la rilevazione della morte cellulare in situ può essere utilizzato con molti sistemi di analisi diversi.
Alcuni esempi sono:
Alcuni esempi sono:
- rilevazione di singole cellule apoptotiche in sezioni di tessuto congelate e fissate in formalina nella ricerca di base,
- determinazione della sensibilità delle cellule maligne all'apoptosi indotta da farmaci nella ricerca sul cancro
- tipizzazione delle cellule in fase di morte cellulare in popolazioni eterogenee mediante procedure di colorazione doppia
Caratteristiche e vantaggi
- Sensibile: la marcatura diretta mediante fluoresceina-dUTP riduce il background di fondo
- Veloce: l'uso della fluoresceina-dUTP consente l'analisi dei campioni direttamente dopo la reazione TUNEL
- Comodo: non richiede alcuna fase preparatoria.
- Accurato: identificazione dell'apoptosi a livello molecolare (rotture del filamento di DNA) e identificazione delle cellule nelle primissime fasi dell'apoptosi
Confezionamento
1 kit comprende 2 componenti.
Nota sulla preparazione
Soluzione di lavoro: aggiungere il volume totale (50 μL) della soluzione enzimatica ai rimanenti 450 μL di soluzione di marcatura per ottenere 500 μL di Mix di reazione TUNEL.
Miscelare bene per equilibrare i componenti.
Miscelare bene per equilibrare i componenti.
Altre note
Esclusivamente per ricerche di life science. Non usare a scopo diagnostico.
Solo come componenti del kit
N° Catalogo
Descrizione
- Enzyme Solution (TdT)
- Label Solution (fluorescein-dUTP)
Avvertenze
Danger
Indicazioni di pericolo
Consigli di prudenza
Classi di pericolo
Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B Inhalation
Codice della classe di stoccaggio
6.1D - Non-combustible acute toxic Cat.3 / toxic hazardous materials or hazardous materials causing chronic effects
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 3
Punto d’infiammabilità (°F)
does not flash
Punto d’infiammabilità (°C)
does not flash
Certificati d'analisi (COA)
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