11636090910
Roche
Kit per la sintesi delle sonde PCR DIG
sufficient for 25 reaction (50 μL final reaction volume)
Sinonimo/i:
DIG system, Sonda
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About This Item
Codice UNSPSC:
41105500
Prodotti consigliati
impiego
sufficient for 25 reaction (50 μL final reaction volume)
Livello qualitativo
Produttore/marchio commerciale
Roche
tecniche
PCR: suitable
Temperatura di conservazione
−20°C
Categorie correlate
Descrizione generale
Il kit per la sintesi delle sonde PCR DIG contiene una formulazione di digossigenina (DIG)-11deossiuridintrifosfato (dUTP) labile agli alcali. Questo kit serve a generare in modo comodo ed efficiente sonde di DNA marcate con DIG a elevata sensibilità nella reazione a catena della polimerasi (PCR). Le sonde sono marcate con DIG-11dUTP (labile agli alcali), con il metodo della PCR. Il rapporto tra DIG-dUTP e dTTP è 1:2.
Il kit per la sintesi delle sonde PCR DIG contiene la miscela di DNA polimerasi ad alta fedeltà Expand. Questa robusta miscela enzimatica con attività di proofreading polimerizza sonde di lunghezza compresa tra 40 bp e 5 kb utilizzando come stampo 10 pg di DNA plasmidico e 10 ng di DNA genomico. Le sonde marcate con DIG sono stabili per oltre un anno.
Il kit per la sintesi delle sonde PCR DIG contiene la miscela di DNA polimerasi ad alta fedeltà Expand. Questa robusta miscela enzimatica con attività di proofreading polimerizza sonde di lunghezza compresa tra 40 bp e 5 kb utilizzando come stampo 10 pg di DNA plasmidico e 10 ng di DNA genomico. Le sonde marcate con DIG sono stabili per oltre un anno.
Applicazioni
Le sonde di DNA marcate con digossigenina (DIG) prodotte con il kit per la sintesi delle sonde PCR DIG sono adatte a rilevare geni in singola copia (o in poche copie) di mRNA raro con southern e northern blot. Le sonde di DNA marcate con DIG sono state usate anche per marcare il DNA durante l′ibridazione in situ.
La concentrazione della miscela di dUTP-nucleotidi fornita può essere regolata in base alla lunghezza delle sonde. Si può rapidamente determinare l′efficacia della marcatura su gel di agarosio.
Seguendo il protocollo del foglietto illustrativo è possibile sottoporre ripetutamente le membrane a stripping e reprobing.
Una reazione di marcatura per PCR (50 μL) di solito fornisce una quantità di sonde sufficiente per 20 mL di soluzione per ibridazione. Il kit può essere usato per circa 25 reazioni (50 μL):
La concentrazione della miscela di dUTP-nucleotidi fornita può essere regolata in base alla lunghezza delle sonde. Si può rapidamente determinare l′efficacia della marcatura su gel di agarosio.
Seguendo il protocollo del foglietto illustrativo è possibile sottoporre ripetutamente le membrane a stripping e reprobing.
Una reazione di marcatura per PCR (50 μL) di solito fornisce una quantità di sonde sufficiente per 20 mL di soluzione per ibridazione. Il kit può essere usato per circa 25 reazioni (50 μL):
Confezionamento
1 kit con 6 componenti.
Qualità
La funzione di ogni lotto del kit per la sintesi delle sonde PCR DIG è analizzata nella PCR. I prodotti dell′amplificazione sono esaminati con western blot genomico.
Nelle condizioni di PCR descritte nel presente foglietto illustrativo, la reazione di controllo genera un prodotto di amplificazione di 442 bp. A causa delle molteplici incorporazioni di DIG-dUTP durante il processo di PCR, il peso molecolare dei prodotti della PCR è significativamente più elevato rispetto al prodotto della PCR non marcato. Dopo ibridazione del prodotto della PCR con 10 μg di DNA genomico umano seguita da rilevamento con chemioluminescenza, si rileva il modello di un frammento specifico.
Nelle condizioni di PCR descritte nel presente foglietto illustrativo, la reazione di controllo genera un prodotto di amplificazione di 442 bp. A causa delle molteplici incorporazioni di DIG-dUTP durante il processo di PCR, il peso molecolare dei prodotti della PCR è significativamente più elevato rispetto al prodotto della PCR non marcato. Dopo ibridazione del prodotto della PCR con 10 μg di DNA genomico umano seguita da rilevamento con chemioluminescenza, si rileva il modello di un frammento specifico.
Solo come componenti del kit
N° Catalogo
Descrizione
- Enzyme Mix, Expand High Fidelity 3.5 U/μl
- PCR DIG Probe Synthesis Mix, containing dATP, dCTP, dGTP (2 mM each) 10x concentrated
- PCR Buffer with MgCl2 10x concentrated
- dNTP Stock Solution, containing dATP, dCTP, dGTP, dTTP (2 mM each), pH 7.0 10x concentrated
- Control Template, plasmid DNA in Tris/EDTA buffer, pH 8.0. The 5-kb plasmid contains the cDNA for the human tissue-type plasminogen activator (tPA) 20 pg/μl
- Control PCR Primer Mix, containing 50 pmol of each primer, control PCR primer 1 and 2 2 mM each
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N° Catalogo
Descrizione
Determinazione del prezzo
Indicazioni di pericolo
Consigli di prudenza
Classi di pericolo
Aquatic Chronic 3
Codice della classe di stoccaggio
12 - Non Combustible Liquids
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 2
Punto d’infiammabilità (°F)
does not flash
Punto d’infiammabilità (°C)
does not flash
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