Purification FLAG®
Les étiquettes FLAG® permettent une détection plus performante et une purification robuste des protéines de fusion recombinantes. Leur utilité a été démontrée dans de nombreuses applications en aval, des tests de capture aux analyses structurales en passant par les dosages d'activité. L'étiquette épitope FLAG® est un peptide de huit acides aminés court et hydrophile (étiquette DYKDDDDK) qui est facilement clivable par l'entérokinase (EK). En raison de sa petite taille et de son caractère hydrophile, l'étiquette FLAG® se trouve généralement à la surface de la protéine de fusion, ce qui limite ses effets sur la fonction, la sécrétion ou le transport de la protéine de fusion. Quelle que soit votre application finale, nous avons les outils qu'il vous faut pour exprimer, purifier et détecter les protéines de fusion FLAG®.
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Produits
Expression de protéines à étiquette FLAG®
Notre gamme de produits d'expression de protéines marquées par une étiquette FLAG® comprend des vecteurs pour l'expression efficace de protéines de fusion recombinantes en bactéries et en cellules de mammifères. La technologie SnapFast™ vous permet de déplacer facilement le gène d'intérêt d'un vecteur à un autre pour un clonage plus efficace et plus économique.
- Le peptide FLAG® standard (séquence : DYKDDDDK) est une petite étiquette qui peut être incorporée avec un risque minime d'encombrement stérique ou d'impact négatif sur la solubilité de la protéine.
- La séquence de l'étiquette 3xFLAG® fusionne trois épitopes FLAG® en tandem pour une détection encore plus performante (jusqu'à 200 fois plus performante) des protéines de fusion.
Purification de protéines à étiquette FLAG®
Nous proposons une diversité de gels d'agarose pour la purification par affinité, de billes magnétiques, de kits de purification et de plaques revêtues pour l'isolement et la purification des protéines marquées par une étiquette FLAG®.
- Les gels d'agarose pour affinité permettent de purifier les protéines contenant une étiquette de fusion grâce à des anticorps anti-FLAG® greffés sur de l'agarose en billes. Adaptées à la purification à petite ou grande échelle, ces résines conviennent à la purification sur colonne gravitaire.
- Les billes magnétiques anti-FLAG® M2 sont utilisées pour purifier les protéines recombinantes avec étiquette de fusion, une plateforme ou un rack magnétique étant utilisé pour séparer les billes et isoler les protéines pour un traitement rapide.
- Les plaques de 96 puits revêtues d'anticorps anti-FLAG® M2 ultrasensibles conviennent au criblage par expression, à l'étude des interactions entres protéines ainsi qu'aux les tests ELISA.
Détection de protéines à étiquette FLAG®
Les étiquettes FLAG® et 3xFLAG™ comportent des sites de liaison à des anticorps monoclonaux anti-FLAG® hautement spécifiques, ainsi qu'à des anticorps polyclonaux et des conjugués pour les tests ELISA, les applications de transfert sur membrane (blotting), l'immunofluorescence, l'immunocytochimie, l'immunohistochimie et la cytométrie en flux.
- L'anticorps anti-FLAG® M2 fixe les protéines de fusion à étiquette FLAG® N-terminale, à étiquette FLAG® C-terminale et à étiquette Met-FLAG®.
- La liaison de l'anticorps anti-FLAG® M1 est calcium-dépendante et spécifique de l'extrémité N-terminale de l'étiquette FLAG®.
- L'anticorps anti-FLAG® M5 fixe les protéines de fusion à étiquette FLAG® N-terminale et Met-FLAG®.
Guide de sélection d'anticorps anti-FLAG®
| Anticorps monoclonal anti-FLAG® M1 produit chez la souris | Anticorps monoclonal anti-FLAG® M2 produit chez la souris | Anticorps monoclonal anti-FLAG® M5 produit chez la souris | ||
|---|---|---|---|---|
| Référence | F3040 | F1804 | F3165 | F4042 |
| Clone | M1 | M2 | M2 | M5 |
| Séquence immunogène | DYKDDDDK | DYKDDDDK | DYKDDDDK | DYKDDDDK |
| Méthode de purification des anticorps | Purification sur protéine A-Sepharose™ | Purification sur matrice exclusive peptide FLAG®-agarose | Purification sur protéine A-Sepharose™ | Purification sur protéine A-Sepharose™ |
| KD | 53,4 nM | 9,3 nM | 9,3 nM | Non disponible |
| Spécificité | Haute spécificité. Reconnaissance de l'épitope FLAG® uniquement lorsqu'il se trouve sur l'extrémité N-terminale libre. | Reconnaissance de la séquence FLAG® située sur l'extrémité N-terminale, l'extrémité Met-N-terminale, l'extrémité C-terminale ou n'importe quel site interne de la protéine de fusion à étiquette FLAG®. | Forte reconnaissance de la protéine de fusion à étiquette FLAG® Met-N-terminale. Faible liaison à la protéine de fusion à étiquette N ou C-terminale. | |
| Sensibilité | Détection de 1 ng de protéine de fusion FLAG-BAP™ sur un dot blot | Détection de 2 ng de protéine sur un dot blot | Détection de moins de 1 ng de protéine de fusion Met-FLAG® sur un dot blot | |
| Recommandé pour : | La détection des protéines de fusion FLAG® dans les systèmes d'expression en cellules de mammifères, en cellules végétales et en bactéries. Très utile pour la purification par affinité. Non recommandé pour la détection des protéines exprimées dans le cytoplasme. | La détection par western blotting des protéines cibles exprimées dans un lysat brut de cellules d'E. coli, de plantes ou de mammifères. | La détection par western blotting des protéines cibles exprimées dans un lysat de cellules de mammifères et de drosophile. Particulièrement utile pour la détection des protéines de fusion à étiquette Met-FLAG exprimées dans le cytoplasme. Non recommandé pour la détection des protéines de fusion exprimées chez E. coli. | |
| Applications* | IP, IC, WB, EIA | IP, IC, WB, EIA | IP, IC, WB, EIA | WB |
| Exigences particulières | La liaison nécessite du calcium (le complexe se dissocie en l'absence d'ions calcium). | – | – | – |
Caractéristiques de liaison des anticorps anti-FLAG®
Anticorps et caractéristiques de liaison | Anticorps anti-FLAG M1 | Anticorps anti-FLAG M2 | Anticorps anti-FLAG M5 |
|---|---|---|---|
| Protéine de fusion à étiquette FLAG N-terminale intacte : Peptide signal – Étiquette FLAG – Protéine | - | + | Non déterminé |
| Protéine de fusion à étiquette FLAG Met-N-terminale : Met – Étiquette FLAG – Protéine | - | + | ++ |
| Protéine de fusion à étiquette FLAG N-terminale : Étiquette FLAG – Protéine | + | + | Faible |
| Peptide FLAG interne : Protéine – Peptide FLAG – Protéine | - | + | Non déterminé |
| Protéine de fusion à étiquette FLAG C-terminale : Protéine – Étiquette FLAG | - | + | Faible |
| Liaison calcium-dépendante (dissociation du complexe dans un tampon contenant de l'EDTA) | + | – | – |
Ressources apparentées
- Brochure: Refine Protein Preparation
Today, researchers are challenged to create high quality samples for meaningful protein analysis, often using cumbersome traditional sample preparation methods. With over 50 years of experience in developing protein sample preparation technologies, Merck is constantly innovating new tools to offer you rapid and efficient solutions that can be smoothly integrated into your workflow.
- User Guide: FLAG - Proven System for Detection and Purification of Proteins
The FLAG Expression System is an established way to express, purify, and detect recombinant fusion proteins. FLAG and 3×FLAG® have proven utility in numerous applications such as Western blotting, immunocytochemistry, immunoprecipitation, flow cytometry, protein purification, and in the study of protein-protein interactions, cell ultrastructure, and protein localization. These small hydrophilic tags facilitate superior detection and purification of recombinant fusion proteins when using our highly specific and sensitive ANTI-FLAG® antibodies.
- Application Note: EZview™ Red Protein A and ANTI-FLAG® M2 Affinity Gels - Immunoprecipitation with Enhanced Visibility Affinity Beads
The strength and specificity of interactions between biomolecules have been exploited for years in biochemical research. Affinity-based protein purification techniques have been used extensively to isolate and purify specific proteins or classes of proteins from complex biochemical mixtures, such as cell lysates..
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