ENDOARGS-RO

Endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage

from Pseudomonas fragi

• Synonyme(s) : protéase
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.4.24.33 (BRENDA, IUBMB)
• Code UNSPSC : 12352204

Propriétés

• Essai: ≥90% (SDS-PAGE)
• Forme: lyophilized
• Activité spécifique: ≥20000 units/mg protein
• Poids mol.: 27 kDa
• Conditionnement: pkg of 2 μg (11420488001); pkg of 3 × 2 μg (11054589001)
• Fabricant/nom de marque: Roche
• pH optimal: 7.0-8.0
• Plage de pH: 6.5-9.0
• Température de stockage: 2-8°C

Description

Description générale

Pseudomonas fragi de type sauvage sécrète une métalloprotéase qui clive les liaisons peptidiques du côté N-terminal des petits acides aminés hydrophiles. Une forme mutée de cette souche produit l′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage, qui est isolée sous forme de protéase hautement purifiée et spécifique.

Spécificité

L′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage est une métalloprotéase. Dans un tampon phosphate, acétate ou Tris à pH 6,0-8,5, elle clive spécifiquement les liaisons peptidiques du côté N-terminal des résidus d′acide aspartique et cystéique. Si la cystéine est réduite ou alkylée, seules les liaisons -↓-Asp-X sont clivées.
La spécificité de l′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage est vérifiée en utilisant le glucagon comme substrat. Des concentrations élevées d′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage (1 partie d′enzyme pour 10 parties de glucagon, au poids) sont incubées pour détecter toute trace d′impuretés comme les protéases contaminantes.
Inactivation à la chaleur : La réaction de la protéase est arrêtée en faisant bouillir pendant 5 minutes.

Application

L′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage est utilisée pour les analyses de structure et de séquence des protéines.[1][2]

Notes préparatoires

Concentration de travail : 2 μg /50 μl d′eau bidistillée
Un flacon (= 2 μg d′enzyme) est dissout dans 50 μl d′eau bidistillée, pour produire un tampon Tris-HCl de concentration 10 mM et pH 7,5.
Solution de travail : Le solvant recommandé est l′eau bidistillée.
Conditions de stockage (solution de travail) : -15 à -25 °C
Une solution dans de l′eau bidistillée est stable pendant une semaine au maximum entre 2 et 8 °C ou pendant un mois entre -15 et -25 °C ; éviter de décongeler plusieurs fois.

Reconstitution

L′endoprotéinase Asp-N de qualité séquençage lyophilisée est reconstituée dans 50 μl d′eau bidistillée. Cela produit un tampon Tris-HCl de concentration 10 mM et pH 7,5. Pour éviter l′autolyse, la température d′incubation ne doit pas dépasser 37 °C.

Autres remarques

Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Informations sur la sécurité

• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): does not flash
• Point d'éclair (°C): does not flash