ABS1513-I-AF488

Anti-phospho-Ubiquitin-(Ser65)-Antikörper, Alexa Fluor^™ 488-Konjugat

from rabbit, ALEXA FLUOR^™ 488

• Synonym(e): Ubiqutin, Ser65 phosphorylated, Ub, Ser65 phosphorylated
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702

Eigenschaften

• Biologische Quelle: rabbit
• Qualitätsniveau: 100
• Konjugat: ALEXA FLUOR^™ 488
• Antikörperform: affinity isolated antibody
• Antikörper-Produkttyp: primary antibodies
• Klon: polyclonal
• Speziesreaktivität: human
• Speziesreaktivität (Voraussage durch Homologie): guinea pig (based on 100% sequence homology), bovine (based on 100% sequence homology), hamster (based on 100% sequence homology), mouse (based on 100% sequence homology), sheep (based on 100% sequence homology), rat (based on 100% sequence homology), nonhuman primates (based on 100% sequence homology), horse (based on 100% sequence homology)
• Methode(n): immunocytochemistry: suitable
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NP_061828; NP_066289
• UniProt-Hinterlegungsnummer: P0CG47
• Versandbedingung: ambient
• Posttranslationale Modifikation Target: phosphorylation (pSer65)
• Angaben zum Gen: human ... UBB(7314)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Ubiquitin (Ub) wird anfangs produziert als Polyubiquitin-B-Vorläuferprotein mit 229 AS (UniProt P0CG47), das vom UBB-Gen (Gen-ID 7314) kodiert wird oder als Polyubiquitin-C-Vorläuferprotein mit 685 AS (UniProt P0CG48), das vom UBC-Gen (Gen-ID 7316) in Menschen kodiert wird. Die C-Termini von Polyubiquitin-B (Cys229) und Polyubiquitin-C (Val685) werden nach der Translation entfernt und anschließend erfolgen weitere posttranslationale Spaltungen, um mehrere identische Kopien von Ubiquitin-Molekülen mit 76 Aminosäuren (auch bekannt als High-Mobility-Group-Protein ohne Histon HMG-20) zu erhalten (drei Kopien pro Polyubiquitin-B und neun Kopien pro Polyubiquitin-C). Kovalente Modifizierungen von Zielproteinen durch verschiedene Ub-Lys-Reste, die während der zellulären DNA-Reparatur, ER-assoziierten Degradation (ERAD), Transkriptionsaktivierung, lysosomalen und proteasomalen Degradation auftreten, sind gut dokumentiert. PINK1 (PTEN-induzierte putative Kinase 1) ist eine Ser/Thr-Kinase, die sich in depolarisierten Mitochondrien spezifisch ansammelt und dort als positiver Regulator der E3-Ubiquitin (Ub)-Ligaseaktivität von Parkin (Park2) fungiert, indem sie Ub an Ser65 und den entsprechenden Ser-Rest an der N-terminalen Ub-ähnlichen (UBL) Domäne von Parkin phosphoryliert. Phosphoryliertes Ub interagiert mit phosphoryliertem Parkin an dessen GINGO0-Domäne auf allosterische Weise, wodurch eine Konformationsänderung induziert und die RING2-Domäne von Parkin katalytischem Cystein ausgesetzt wird, um volle Ligaseaktivität zu erzielen. Eine NMR-basierte Konformationsuntersuchung zeigt, dass an Ser65 phosphoryliertes Ub in Lösung in zwei Konformationen existiert. Die Hauptkonformation verfügt über veränderte Oberflächeneigenschaften, während die zweite phosphoUb-Konformation ein zum Ub-Kern hin um zwei Reste verkürztes C-terminales Ende aufweist. Die Ub-Ser65-Phosphorylierung hat nur eine geringe Auswirkung auf die E1-vermittelte E2-Ladung und beeinflusst vorwiegend die Entladung von E2-Enzymen, um polyUb-Ketten zu bilden. Darüber hinaus weisen die meisten Deubiquitinasen (DUB), einschließlich USP8, USP15 und USP30, nachweislich eine eingeschränkte Aktivität gegenüber Lys63-verknüpftem poly-phosphoUb auf.

Spezifität

Die Zielspezifität wurde unter Verwendung des unkonjugierten Antikörpers (ABS1513-I) verifiziert. Es wurden nur an Ser65 phosphoryliertes Ubiquitin (Ub) und ubiquitinierte Proteine (darunter oligoUb und polyUb), die an Ser65 phosphoryliertes Ubiquitin enthalten, nachgewiesen. Bei fehlender Ub-Ser65-Phosphorylierung zeigt dieser Antikörper keine Reaktivität gegenüber Ub oder ubiquitinierter Proteine.

Immunogen

An KLH konjugierte lineares Peptid, das der Ubiquitin-Zielregionensequenz entspricht, die phosphoryliertes Ser65 enthält.

Anwendung

Der unkonjugierte Antikörper (Best.-Nr. AB1513-I) ist auch für Immunzytochemie- und Western-Blot-Anwendungen verfügbar.

Dieser poyklonale Kaninchenantikörper, Anti-phospho-Ubiquitin-(Ser65)-Antikörper, Alexa Fluor^™ 488-Konjugat, ist für die Verwendung in der Immunzytochemie validiert und wird zum Nachweis der Ubiquitin-Ser65-Phosphoylierung eingesetzt.

Forschungskategorie
Signalisierung

Qualität

Mittels Immunzytochemie in PINK1-exprimierenden HeLa-Zellen mit oder ohne CCCP-Behandlung beurteilt.

Immunzytochemische Analyse: Mit einer Verdünnung dieses Antikörpers im Verhältnis 1:100 wurde die durch die CCCP-Behandlung initiierte Ubiquitin-Ser65-Phosphorylierung in PINK1-exprimierenden HeLa-Zellen nachgewiesen.

Zielbeschreibung

~ 17/8 kDa (Dimer/Monomer) und ~ 45–250 kDa gemessen. 8,565/17,112/25,66/34,21 kDa (mono-/di/tri-/tetra-Ubiquitin) berechnet. Die Banden mit ~ 45–250 kDa repräsentieren ubiquitinierte Proteine, die an Ser65 phosphoryliertes Ub enthalten. Nicht charakterisierte Banden können in manchen Lysaten beobachtet werden.

Physikalische Form

Affinitätsgereinigt.

Aufgereinigter polyklonaler Kaninchenantikörper in PBS mit 1,5% BSA und 0,05% Natriumazid.

Lagerung und Haltbarkeit

Bei 2–8 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar.

Sonstige Hinweise

Konzentration: Die Konzentration entnehmen Sie bitte dem chargenspezifischen Datenblatt.

Rechtliche Hinweise

ALEXA FLUOR is a trademark of Life Technologies

Haftungsausschluss

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 2