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Mélange KAPA2G de génotypage rapide à démarrage à chaud

with dye

• Synonyme(s) : PCR, génotypage
• Code UNSPSC : 41106300
• Nomenclature NACRES : NA.55

Propriétés

• Niveau de qualité: 100
• Utilisation: sufficient for 100 reactions; sufficient for 500 reactions
• Durée de conservation: ≤18 mo.
• Caractéristiques: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included; hotstart
• Conditionnement: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5620); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5621)
• Fabricant/nom de marque: Roche
• Technique(s): PCR: suitable; genotyping: suitable
• Entrée: crude DNA
• Température de stockage: −20°C

Description

Description générale

Les kits de génotypage de souris rapide à démarrage à chaud KAPA2G Fast HotStart^® comprennent le système KAPA Express Extract, nouveau système de tampon et de protéase thermostable qui permet d'extraire de l'ADN prêt pour PCR à partir de tissus de souris en seulement 15 minutes, ainsi que le mélange pour génotypage rapide KAPA2G Fast avec colorant, qui contient une ADN polymérase créée par évolution dirigée pour présenter une haute processivité et une très grande rapidité. L'utilisation conjointe du système KAPA Express Extract et du mélange pour génotypage rapide KAPA2G Fast permet d'extraire et d'amplifier des fragments d'ADN de manière fiable à partir de tissus de souris en seulement 1 heure, contre plus de 24 heures avec les protocoles classiques. Le mélange pour génotypage rapide KAPA2G Fast (concentré 2 ×) est un mélange maître prêt à l'emploi qui contient tous les ingrédients nécessaires à la réalisation d'une PCR rapide avec des stabilisants et deux colorants inertes, à l'exception des amorces et des matrices.

Application

Le mélange pour génotypage rapide à démarrage à chaud KAPA2G Fast HotStart^® a été utilisé dans les applications suivantes :

• extraction d'ADN génomique et préparation de mélange maître pour PCR
• extraction et amplification de tissus de queue, d'oreille ou d'orteil de souris
• extraction et amplification d'ADN à partir d'autres tissus d'origine animale

Actions biochimiques/physiologiques

Les fragments d'ADN produits avec le mélange pour génotypage rapide KAPA2G Fast comportent une queue 3'-dA et peuvent être clonés dans des vecteurs de clonage de type TA ou utilisés pour des applications ou des analyses de routine en aval, dont la digestion par enzymes de restriction, le clonage et le séquençage. Comme la Taq polymérase sauvage, le mélange KAPA2G Fast présente une activité polymérase 5'→3' et une activité exonucléase 5'→3', mais il ne possède pas d'activité exonucléase 3'→5' correctrice. La fidélité du mélange KAPA2G Fast est comparable à celle de la Taq polymérase sauvage ; son taux d'erreurs est d'environ 1 erreur pour 1,7 × 10⁵ nucléotides incorporés. Contrairement aux protocoles existants qui s'appuient sur une digestion par la protéinase K, le système KAPA Express Extract permet de réaliser plusieurs extractions dans un seul et même tube, pour plus de commodité, sans nécessiter l'ajout de produits chimiques dangereux ni plusieurs étapes de lavage.

Caractéristiques et avantages

Augmentation de la cadence d′analyse, diminution du délai d'exécution et amélioration de la fiabilité :

• Production d′ADN prêt pour la PCR en seulement 15 minutes.
• Manipulations minimales, réduisant le risque de perte d′échantillon ou de contamination.
• Quantité de matrice suffisante pour plusieurs analyses, facilement adaptable à la manipulation d′échantillons sur des plaques de 96 puits.
• Amplification fiable et rapide de fragments d′ADN pour une large gamme de longueurs d′amplicon et de taux de GC.

Dépassement des performances des méthodes d′extraction brute et des kits du commerce :

• Réduction des temps d′exécution.
• Augmentation de la spécificité.
• Réduction des coûts.

Remarques :

• Extraction d′ADN prêt pour la PCR à partir de tissus de queue, d′oreille ou d′orteil de souris en 15 minutes.
• Avant de procéder à la PCR, diluer dix fois l′extrait d′ADN dans du tampon Tris-HCl 10 mM (pH 8,0-8,5), et utiliser 1 μl d′ADN par réaction de 25 μl.
• Les extraits sont stables > 6 mois à -20 °C.
• Le Mélange de génotypage rapide (à démarrage à chaud) KAPA2G contient l′ADN polymérase rapide KAPA2G modifiée pour PCR rapide, ainsi qu′un tampon, du MgCl₂ (1,5 mM en 1X) et des dNTP (0,2 mM chacun en 1X).
• Le Mélange de génotypage rapide KAPA2G comprend un tampon de charge pour électrophorèse contenant un colorant, ce qui permet de placer directement les produits de PCR sur des gels d′agarose pour l′analyse.
• Utiliser un temps d′hybridation de 15 s, en rajoutant 15 s pour les amplicons <1 kb, ou 15-30 s par kilobase pour les amplicons plus longs.

Conditionnement

• Mélange KAPA2G Fast (concentré 2 ×) pour génotypage rapide standard ou à démarrage à chaud, avec colorant

Produit expédié dans de la glace carbonique ; dans certains cas, les conditions d'expédition peuvent varier d'une région à l'autre.

Qualité

Tous les constituants des Kits de génotypage de souris rapide à démarrage à chaud KAPA2G sont soumis à des tests de contrôle qualité exigeants, ne présentent aucune activité endonucléase/exonucléase contaminante et répondent à des critères stricts en matière de contamination par l'ADN.

Notes préparatoires

Vérifiez toujours que le produit soit complètement décongelé et mélangé avant emploi. Les réactifs peuvent être stockés à 4 °C pour une utilisation à court terme (jusqu'à 1 mois). Pour un stockage à long terme, replacez-les à-20 °C. Si tous les constituants ont été manipulés avec les soins nécessaires et sont exempts de contaminations, le kit ne devrait pas être affecté s′il est laissé accidentellement à température ambiante pendant une courte durée (3 jours maximum).

Autres remarques

Produit réservé aux activités de recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Informations légales

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08
• Mention d'avertissement: Warning
• Mentions de danger: H371
• Conseils de prudence: P260 - P264 - P270 - P308 + P311 - P405 - P501
• Classification des risques: STOT SE 2
• Code de la classe de stockage: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): does not flash
• Point d'éclair (°C): does not flash