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  • Functional characterisation and expression analysis of recombinant serum amyloid P isoform 1 (RbSAP1) from rock bream (Oplegnathus fasciatus).

Functional characterisation and expression analysis of recombinant serum amyloid P isoform 1 (RbSAP1) from rock bream (Oplegnathus fasciatus).

Fish & shellfish immunology (2015-04-29)
Kwang-Min Choi, Sang Hee Shim, Cheul Min An, Bo-Hye Nam, Ji-Min Jeong, Ju-Won Kim, Chan-Il Park
RÉSUMÉ

Lectins are carbohydrate-binding proteins that play important roles in the recognition and elimination of pathogens via the innate immune system. Pentraxins (PTX) are humoral lectins, which are multifunctional proteins in vertebrates. Pentraxins can be divided into two groups based on their primary structure: short (C-reactive protein and serum amyloid P [SAP]) and long pentraxins (PTX3 and neuronal pentraxins). Previously, SAP was shown to have Ca(2+)-dependent binding specificity for various ligands and to be a major acute phase protein. In this study, we identified and characterised the gene encoding SAP isoform 1 in rock bream (Oplegnathus fasciatus) (RbSAP1) and analysed its expression in various tissues after a pathogen challenge. An alignment analysis conducted based on the deduced amino acid sequence of RbSAP1 (1918 bp full-length cDNA with a 699 bp open reading frame encoding 232 amino acids) and SAPs and PTXs isolated from other organisms, revealed that the pentraxin domain and cysteine residues of the deduced protein are conserved. RbSAP1, which was ubiquitously expressed in all tissues examined, was predominantly detected in head kidney, trunk kidney, peripheral blood leukocytes, and gills. RbSAP1 expression was dramatically up-regulated in the kidney and liver after infection with Edwardsiella tarda, Streptococcus iniae, or red seabream iridovirus. Purified rRbSAP1 was able to bind Gram-negative bacteria, Gram-positive bacteria, and pathogen-associated molecular patterns. Interestingly, rRbSAP1 aggregated Gram-negative bacteria in the presence of Ca(2+). The anti-pathogen activity of rRbSAP1 suggests that SAP functions in innate immunity in the rock bream.

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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, for molecular biology, DNase, RNase, and protease, none detected, ≥99% (titration)
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Sigma-Aldrich
Urée, powder, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture
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Chlorure de sodium solution, 0.9% in water, BioXtra, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, ≥99%
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium solution, 5 M in H2O, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture
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L-Glutathion réduit, suitable for cell culture, BioReagent, ≥98.0%, powder
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Sigma-Aldrich
L-Arginine, from non-animal source, meets EP, USP testing specifications, suitable for cell culture, 98.5-101.0%
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SAFC
Chlorure de sodium solution, 5 M
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Sigma-Aldrich
Urea solution, BioUltra, ~8 M in H2O
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Supelco
Urea, 8 M (after reconstitution with 16 mL high purity water)
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Sigma-Aldrich
Ampicillin, anhydrous, 96.0-102.0% (anhydrous basis)
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Sigma-Aldrich
Acide éthylènediaminetétraacétique solution, 0.02% in DPBS (0.5 mM), sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Fluorescein 5(6)-isothiocyanate, BioReagent, suitable for fluorescence, mixture of 2 components, ≥90% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, anhydrous, crystalline, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, 99.995% trace metals basis
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Chlorure de sodium solution, BioUltra, for molecular biology, ~5 M in H2O
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Chlorure de sodium, 99.999% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, BioUltra, for molecular biology, ≥99.5% (AT)
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Urée, BioXtra, pH 7.5-9.5 (20 °C, 5 M in H2O)
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L-Arginine
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Urée, BioUltra, for molecular biology, 99% (T)
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Sigma-Aldrich
Urée, suitable for electrophoresis
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Sigma-Aldrich
L-Arginine, 99%, FCC, FG
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, ACS reagent, 99.4-100.6%, powder
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Urée, ACS reagent, 99.0-100.5%
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L-Glutathion réduit, ≥98.0%
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Sigma-Aldrich
Chlorure de sodium, BioXtra, ≥99.5% (AT)
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Sigma-Aldrich
Fluorescein 5(6)-isothiocyanate, ≥90% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Fluorescein isothiocyanate isomer I, ≥97.5% (HPLC)
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