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G4510
Agarose−glutathion
Glutathione−Agarose
lyophilized powder
Synonyme(s) :
Résine d'agarose-glutathion, Agarose glutathion à liaison S, Agarose-GSH
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About This Item
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Produits recommandés
Forme
lyophilized powder
Niveau de qualité
Classe(s) chimique(s) de l'analyte
proteins (GST)
Ampleur du marquage
≥10 μmol per mL gel
Technique(s)
immunoprecipitation (IP): suitable
protein purification: suitable
Matrice
4% cross-linked beaded agarose
Activation de la matrice
epoxy
Fixation de matrice
sulfur
Espaceur de matrice
12 atoms (10 carbon)
Température de stockage
−20°C
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Description générale
La glutathion S-transférase est une protéine d'un poids moléculaire de 26 kDa naturellement présente dans les cellules eucaryotes. Elle appartient à la famille des enzymes de détoxification de phase II. L'agarose-glutathion se compose de perles d'agarose réticulées à 4 % et activées par des groupements époxyde, sur lesquelles est fixé, via son atome de soufre, du glutathion qui forme ainsi un bras d'espacement de 12 atomes (10 carbones). L'agarose-glutathion se présente sous la forme d'une poudre lyophilisée stabilisée par du lactose.
Application
L'agarose-glutathion a servi :
- à purifier une protéine fusionnée à de la glutathion S-transférase (GST) en vue de générer l'anticorps polyclonal M4P.
- à incuber des fractions de surnageant afin de purifier de la p53 complète (aa 1-393) ainsi que son domaine de liaison à l'ADN (aa 94-288).
- dans la purification par affinité d'une protéine de fusion.
La chromatographie d'affinité avec de l′agarose-glutathion assure une purification rapide, non dénaturante, en conditions douces et hautement sélective des protéines contenant des séquences de liaison au glutathion, telles que la glutathion S-transférase (GST), la glutathion peroxydase et la glyoxalase I.
Actions biochimiques/physiologiques
Les glutathion S-transférases (GST), une superfamille d'isoenzymes de détoxification multifonctionnelles, jouent un rôle important dans la signalisation cellulaire. Les GST apparaissent comme des cibles thérapeutiques prometteuses en raison de la surexpression de certaines isoenzymes dans diverses tumeurs et de leur potentielle implication dans l'évolution d'autres maladies telles que les maladies neurodégénératives, la sclérose en plaques et l'asthme.
Caractéristiques et avantages
- Produit assurant une purification douce, non dénaturante et extrêmement sélective des enzymes qui se lient au glutathion.
- Durée de conservation de deux ans à -20 °C si le produit est correctement déshydraté.
- Capacité de liaison : 5-10 mg de glutathion S-transférase par ml de résine.
Quantité
Un gramme de poudre gonfle en donnant ≥10 ml de gel
Forme physique
Poudre lyophilisée stabilisée par du lactose
Code de la classe de stockage
11 - Combustible Solids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 3
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
Équipement de protection individuelle
Eyeshields, Gloves, type N95 (US)
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Tests, réactifs et protocoles permettant d'étudier les interactions protéines/protéines in vitro par différentes méthodes : pull-down ou GST pull-down, purification par affinité en tandem (TAP pour "Tandem Affinity Purification") et co-immunoprécipitation.
Investigate in vitro protein-protein interactions with pull-down assays, utilizing affinity, GST pull-down, TAP, and co-immunoprecipitation methods.
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What is the Department of Transportation shipping information for this product?
1 answer-
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When using Product G4510, Glutathione-Agarose, how do I store the swollen resin?
1 answer-
After the resin has been swollen, it can be stored in 2 M NaCl at 2 to 8 °C. For long-term storage, a bacteriostatic agent such as 1 mM sodium azide or 0.02% thimerosal should be included. Alternatively, the resin can be relyophilized after addition of lactose.
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How much Product G4510, Glutathione-Agarose, do I receive and how do I swell my powder?
1 answer-
This material is sold by the final volume of gel produced after swelling of the powder. One gram of powder swells to approximately 14 mL of gel. (Approximately 70 mg of powder swells to 1 mL of gel.) Swell the lyophilized powder in deionized water (use of some buffers can result in non-recoverable loss of volume) at 200 mL/g. Typically 90 to 95% of swelling occurs within 30 minutes at room temperature, but it may require overnight at 2 to 8 °C for 100% swelling to occur. After swelling, the agarose beads must be washed thoroughly with 10 volumes of water or equilibration buffer (such as PBS) to remove the lactose present in the lyophilized product.
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How is Product G4510, Glutathione-Agarose, resin conjugated to the glutathione, and what is the binding capacity of the resin?
1 answer-
This product consists of glutathione attached through the sulfur to epoxy activated 4% cross-linked beaded agarose, resulting in a 12 atom spacer. Binding capacity: approx. 5 to 10 mg glutathione S-transferase per mL resin.
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What reagents are compatible with Product G4510, Glutathione-Agarose, resin?
1 answer-
Tris or phosphate buffers (pH 6.5 to 9.5) are typical lysis buffers compatible with glutathione affinity chromatography. Salt concentrations of up to 1 Molar do not interfere with binding. Protease inhibitors such as EDTA (Product No. E7889) or PMSF (Product No. P7626) are often included in the lysis buffer. Serine protease inhibitors included in the lysis buffer will not interfere with subsequent thrombin or factor Xa treatment as these inhibitors are removed before the proteolysis step. The binding of GST to glutathione-agarose is unaffected by 1% Triton X-100, 1% Tween-20, 1% CTAB, 10 mM DTT or 0.03% SDS.
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How do I regenerate Product G4510, Glutathione-Agarose, resin?
1 answer-
Regeneration method:1. Wash with approximately 5 resin volumes of 0.1 M borate buffer, pH 8.5 containing 0.5 M NaCl (Cleansing Buffer 1).2. Wash with at least 5 column volumes of deionized water.3. Wash with at least 5 column volumes of 0.1 M acetate buffer, pH 4.5, containing 0.5 M NaCl (Cleansing Buffer 2).4. Wash with approximately 5 resin volumes of deionized water. For long-term storage, store in 2 M NaCl containing a bacteriostatic agent.5. Equilibrate with equilibration buffer before use.
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