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KAPA2G Fast Multiplex Mix

suitable for PCR, 2 ×

• Synonyme(s) : PCR, PCR multiplex, multiplex
• Code UNSPSC : 41106300
• Nomenclature NACRES : NA.55

Propriétés

• Durée de conservation: ≤12 mo.
• Niveau de qualité: 100
• Conditionnement: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5801); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5802)
• Fabricant/nom de marque: Roche
• Concentration: 2 ×
• Technique(s): PCR: suitable
• Température de stockage: −20°C

Description

Description générale

Les kits pour PCR multiplex rapide KAPA2G Fast Multiplex contiennent une enzyme de deuxième génération (2G) dérivée d'un procédé d'évolution dirigée. L'ADN polymérase KAPA2G Fast HotStart^® est une formulation pour PCR à démarrage à chaud contenant un anticorps qui a été créée pour présenter une haute processivité et une très grande rapidité. Elle permet d'obtenir une vitesse d'élongation nettement supérieure à celle de la Taq polymérase sauvage. Outre sa rapidité, la polymérase KAPA2G Fast présente un meilleur rendement et une plus haute sensibilité que les enzymes concurrentes, ce qui permet de réaliser des PCR multiplex plus uniformes.
Les kits pour PCR rapide à démarrage à chaud KAPA2G Fast HotStart® sont conçus pour réaliser des PCR rapides, avec un temps de réaction total réduit de 20 % à 70 % par rapport aux PCR conventionnelles réalisées avec la Taq polymérase sauvage. Un résultat qui peut être obtenu sans sacrifier les performances réactionnelles et sans nécessiter de thermocycleur ou de consommables spécifiques.

Application

Le mélange pour PCR multiples rapide KAPA2G Fast Multiplex a été utilisé dans les applications suivantes :

• génotypage d'organismes transgéniques
• amplification de microsatellites
• typage et détection d'agents pathogènes
• amplification de plusieurs fragments d'ADN pour génotypage SNP
• PCR semi-quantitative
• PCR triplex

Actions biochimiques/physiologiques

Les fragments d'ADN produits avec l'ADN polymérase KAPA2G Fast présentent les mêmes caractéristiques que ceux produits avec la Taq polymérase sauvage et peuvent être utilisés pour un séquençage, une digestion par enzymes de restriction et un clonage. Comme la Taq polymérase sauvage, le mélange KAPA2G Fast présente une activité polymérase 5'→3' et une activité exonucléase 5'→3', mais il ne possède pas d'activité exonucléase 3'→5' correctrice. La fidélité du mélange KAPA2G Fast est comparable à celle de la Taq polymérase sauvage ; son taux d'erreurs est d'environ 1 erreur pour 1,7 × 10⁵ nucléotides incorporés. Les produits de PCR obtenus avec le mélange KAPA2G Fast comportent une queue 3'-dA et peuvent être clonés dans des vecteurs de clonage de type TA.

Caractéristiques et avantages

Amélioration de la sensibilité, de la spécificité et du rendement

• Représentation uniforme de tous les amplicons
• PCR multiplex efficace avec les cibles difficiles riches en GC

Vitesse accrue sans compromettre la performance

• Réduction de 60 % de la durée des cycles
• Phases d′extension courtes, à partir de 15 secondes

Remarques :

• Le KAPA2G Fast Multiplex Mix contient l′ADN polymérase KAPA2G Fast HotStart modifiée pour une amplification multiplex rapide et efficace
• Le KAPA2G Fast Multiplex Mix contient un tampon optimisé pour la PCR multiplex, avec 0,2 M de chaque dNTP et du MgCl₂ à 3 mM (à la concentration 1X).
• Utilisez 0,2 μM de chaque amorce et 10–100 ng d′ADN de matrice par réaction.
• Procédez à l′appariement à 60 °C pendant 30 secondes.
• Réalisez l′extension pendant 15 secondes (ou plus pour les longs amplicons ou les réactions multiplex complexes).

Qualité

Chaque lot d′ADN polymérase KAPA2G Fast HotStart rapide à démarrage à chaud est validé comme contenant < 2 % de protéines contaminantes (dosage de protéines Agilent 230). Les kits de PCR KAPA2G Fast Multiplex sont soumis à des tests de contrôle qualité exigeants, ne présentent aucune activité endonucléase/exonucléase contaminante et répondent à des critères stricts en matière de contamination par l′ADN.

Notes préparatoires

Assurez-vous toujours que le produit est complètement décongelé et mélangé avant emploi. Les réactifs peuvent être stockés à 4 °C pour une utilisation à court terme (jusqu′à 1 mois). Pour un stockage à long terme, replacez-les à-20 °C. Si le ReadyMix a été manipulé avec les soins nécessaires et n′est pas contaminé, le kit ne devrait pas être affecté s′il est laissé accidentellement à température ambiante pendant une courte durée (3 jours maximum). Une conservation prolongée à température ambiante ou à 4 °C n′est pas recommandée. Remarque : les réactifs conservés à une température supérieure à -20 °C sont plus susceptibles d′être dégradés en cas de contamination lors de l′emploi. Par conséquent, les risques du stockage à ces températures n′incombent qu′à l′utilisateur.

Autres remarques

Pour une utilisation en recherche uniquement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Informations légales

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

Composants de kit seuls

• KAPA2G Fast HotStart^® DNA Polymerase
• Reaction buffer
• dNTPs
• MgCl₂ 3 mM

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS07,GHS08
• Mention d'avertissement: Warning
• Mentions de danger: H302,H371
• Conseils de prudence: P260 - P264 - P270 - P301 + P312 + P330 - P308 + P311 - P501
• Classification des risques: Acute Tox. 4 Oral - STOT SE 2
• Code de la classe de stockage: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): does not flash
• Point d'éclair (°C): does not flash