NA0100

PhasePrep^™ BAC-DNA-Kit

Scalable method for isolating large-molecular weight plasmids

• Synonym(e): BAC-Kit
• NACRES: NA.52
• UNSPSC Code: 41105501

Eigenschaften

• Quality Segment: 200
• technique(s): DNA extraction: suitable
• storage temp.: 15-25°C

Beschreibung

General description

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Das PhasePrep BAC-DNA-Kit bietet eine skalierbare und kostengünstige Lösung für die Isolierung von Plasmiden mit hohem Molekulargewicht, etwa von künstlichen Bakterienchromosomen (BAC, Bacterial Artificial Chromosomes) aus rekombinanten E. coli-Kulturen. Das Kit ist für Aufbereitungen in vier verschiedenen Größen geeignet und enthält ausreichend Reagenzien für 300-Mikro-, 180-Mini-, 30-Midi- oder 15-Maxi-Präparate. Aus rekombinanten Übernacht-E. coli-Kulturen mit 5, 40, 250 oder 500 ml Volumen können 2, 12, 50 oder 100 mg BAC-DNA gewonnen werden. Die aufgereinigte BAC-DNA enthält sehr geringe Mengen von Endotoxinen (≤10 EU/μg DNA).

Eine rekombinante E. coli-Kultur wird durch Zentrifugation geerntet und einem modifizierten alkalischen Lyseverfahren mit SDS unterzogen. Aus dem geklärten Lysat wird Nukleinsäure ausgefällt; Rest-RNA wird durch einen kurzen Verdau bei erhöhten Temperaturen mit einer RNase-Mischung entfernt. Endotoxine und andere Verunreinigungen werden mittels einfacher temperaturvermittelter Extraktion und Phasentrennung entfernt. Abschließend wird die BAC-DNA selektiv aus der Lösung ausgefällt.

Die gewonnene BAC-DNA liegt hauptsächlich in ihrer eng aufgewickelten Form vor und ist frei von Verunreinigungen mit RNA; sie ist für die sofortige Verwendung in Downstream-Anwendungen wie Sequenzierung, Restriktionsverdau, Klonen und PCR bereit.

Das PhasePrep^™ BAC-DNA-Kit bietet eine skalierbare und kostengünstige Lösung für die Isolierung von Plasmiden mit hohem Molekulargewicht, etwa von künstlichen Bakterienchromosomen (BAC) aus rekombinanten E. coli-Kulturen. Das Kit ist für Aufbereitungen in vier verschiedenen Größen geeignet und enthält ausreichend Reagenzien für 300-Mikro-, 180-Mini-, 30-Midi- oder 15-Maxi-Präparate. Aus rekombinanten Übernacht-E. coli-Kulturen mit 5, 40, 250 oder 500 ml Volumen können 2, 12, 50 oder 100 mg BAC-DNA gewonnen werden. Die aufgereinigte BAC-DNA enthält sehr geringe Mengen von Endotoxinen (£10 EU/g DNA).

Eine rekombinante E. coli-Kultur wird durch Zentrifugation geerntet und einem modifizierten alkalischen Lyseverfahren mit SDS unterzogen. Aus dem geklärten Lysat wird Nukleinsäure ausgefällt; Rest-RNA wird durch einen kurzen Verdau bei erhöhten Temperaturen mit einer RNase-Mischung entfernt. Endotoxine und andere Verunreinigungen werden mittels einfacher temperaturvermittelter Extraktion und Phasentrennung entfernt. Abschließend wird die BAC-DNA selektiv aus der Lösung ausgefällt.

Application

Das PhasePrep^™ BAC-DNA-Kit wird verwendet, um künstliche Bakterienchromosomen (BAC, Bacterial Artificial Chromosomes) zu isolieren.

Die gewonnene BAC-DNA liegt hauptsächlich in ihrer eng aufgewickelten Form vor und ist frei von Verunreinigungen mit RNA; sie ist für die sofortige Verwendung in Downstream-Anwendungen wie Sequenzierung, Restriktionsverdau, Klonen und PCR bereit.

Features and Benefits

• Typischer DNA-Ertrag von 2–100 μg aus 5–500 ml Übernachtkultur
• Keine Phenol-Chloroform-Extraktion erforderlich
• Maximale Mikro- bis Maxi-Aufbereitungen mit ein und demselben Kit
• Kein langes Warten auf Tropfsäulen

• Typischer DNA-Ertrag von 2–100 μg aus 5–500 ml Übernachtkultur
• Maximale Mikro- bis Maxi-Aufbereitungen mit ein und demselben Kit
• Kein langes Warten auf Tropfsäulen

Other Notes

Weitere Informationen finden Sie unter www.sigma-aldrich.com/genelutehp.

Das PhasePrep^™ BAC-DNA-Kit bietet eine hochgradig skalierbare, schnelle und kostengünstige Lösung für die Isolierung von Plasmiden mit hohem Molekulargewicht, etwa von künstlichen Bakterienchromosomen (BAC, Bacterial Artificial Chromosomes) aus rekombinanten E. coli-Kulturen.

Legal Information

PhasePrep is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Kit-Komponenten auch einzeln erhältlich

• R6148

  RNase A solution 2

  SDB
• R1149

  Resuspension Solution, Add RNase A before use. After addition of RNAse, store at 2-8ºC. ) 2

  SDB
• L1912

  Lysis Solution 2

  SDB
• E4274

  Endotoxin Removal solution, Remove lipopolysaccharides (LPS) from plasmid DNA preparations

  SDB
• S2404

  Sodium acetate buffer solution, pH 7.0±0.05 (25 °C), BioXtra, Molecular Biology, 3 M, non-sterile; 0.2 μm filtered

  SDB

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08,GHS05,GHS07
• signalword: Danger
• hcodes: H290,H315,H319,H334,H336
• pcodes: P234 - P261 - P264 - P271 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Met. Corr. 1 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Central nervous system
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• wgk: WGK 3
• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids