RAP-RO

rAPid Alkalische Phosphatase

1 units/μg protein, optimum reaction temp. 37 °C

• Synonym(e): Alkalische Phosphatase, Klonierung von DNA-Fragmenten
• EC-Nummer: 3.1.3.1 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.21

Eigenschaften

• Biologische Quelle: bovine intestine
• Qualitätsniveau: 100
• Rekombinant: expressed in Pichia pastoris
• Form: liquid
• Spezifische Aktivität: 1 units/μg protein
• Mol-Gew.: monomer 56 kDa by SDS-PAGE
• Verpackung: pkg of 1,000 U (04898133001 [1 U/μl]); pkg of 5,000 U (04898141001 [1 U/μl])
• Hersteller/Markenname: Roche
• Konzentration: <0.1 % (w/w)
• Parameter: 37 °C optimum reaction temp.
• Methode(n): molecular cloning: suitable
• Farbe: colorless
• pH-Wert: 7.6-8.5 (68 °F)
• Löslichkeit: water: miscible
• Eignung: suitable for molecular biology
• NCBI-Hinterlegungsnummer: QBZ39068
• UniProt-Hinterlegungsnummer: P09487; ; P09487
• Anwendung(en): life science and biopharma
• Fremdaktivität: Nicking activity, none detected (up to 20 µl enzyme using pBR322-DNA/ 16h / 37°C); unspecific endonuclease, none detected (up to 20 µl enzyme using Lambda-DNA 16 h/37 °C)
• Lagertemp.: −20°C
• Angaben zum Gen: bovine ... ALPI(280993)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

rAPid Alkalische Phosphatase ist eine alkalische Phosphatase, die aus Rinderinnereien isoliert und als rekombinantes Enzym mit einem Molekulargewicht von 56 kD geliefert wird, exprimiert in der Hefe Pichia Pastoris. Die rekombinante Form gewährleistet Einheitlichkeit und Sicherheit. rAPid Alkalische Phosphatase katalysiert die Dephosphorylierung von 5′-Phosphaten aus DNA und RNA, Nukleotiden und Proteinen. Eine Behandlung mit alkalischer Phosphatase verhindert die Selbstligation von DNA-Fragmenten, da so die 5′-Phosphoryl-Termini entfernt werden, die von Ligasen benötigt werden. Diese Eigenschaft spielt in Klonierungstechniken eine wichtige Rolle, um den Vektor-Hintergrund zu verringern. Anders als Phosphatase aus Kalbsinnereien wird rAPid Alkalische Phosphatase durch eine Hitzebehandlung von zwei Minuten Dauer bei +75 °C rasch, vollständig und irreversibel inaktiviert. Daher ist das Produkt eine ausgezeichnete Alternative zu alkalischer Phosphatase der Garnele. Außerdem ist das Enzym in Restriktionsenzympuffern aktiv. Daher können der Verdau von Restriktionsenzym, die Dephosphorylierung, die Enzym-Inaktivierung, die Ligation und die 5′-Enden-Markierung ohne Aufreinigungsschritte durchgeführt werden.

Spezifität

Alkalische Phosphatase katalysiert die Hydrolyse zahlreicher Phosphatester, beispielsweise von Estern primärer und sekundärer Alkohole, Saccharide, cyclischer Alkohole, Phenole und Amine. Phosphodiester reagieren nicht. Das Enzym hydrolysiert anorganisches Pyrophosphat. Die kinetischen Eigenschaften des Enzyms hängen von vielen Faktoren ab, beispielsweise der Reinheit des Enzyms, der Enzymkonzentration im Assay, dem Puffer, dem pH-Wert usw.
Hitzeinaktivierung: rAPid Alkalische Phosphatase wird durch eine Inkubation von zwei Minuten Dauer bei 75 °C inaktiviert.

Anwendung

• rAPid Alkalische Phosphatase kann in vielen Anwendungen eingesetzt werden, einschließlich: Entfernung von 5′-Phosphorylgruppen von Nukleinsäuren
• Herstellung von Templates für die 5′-Enden-Markierung
• Aufreinigung von PCR-Produkten durch Entfernung von dNTPs
• Dephosphorylierung von Proteinen

Hinweis: rAPid Alkalische Phosphatase wird durch eine Inkubation von zwei Minuten Dauer bei +75 °C sehr rasch inaktiviert. Nach der Restriktion und Dephosphorylierung sind keine weiteren Aufreinigungsschritte erforderlich. Die dephosphorylierte DNA kann direkt in einer Ligationsreaktion eingesetzt werden.
Hinweis: rAPid Alkalische Phosphatase ist auch im Rapid DNA Dephos & Ligation Kit enthalten, das die schnelle und effiziente Dephosphorylierung und Ligation von DNA-Fragmenten mit kohäsiven und glatten Enden ermöglicht. Mit diesem praktischen Kit wird die Dephosphorylierung von glatten und von kohäsiven 5′-überhängenden Enden bei einer Temperatur von +37 °C innerhalb von zehn Minuten durchgeführt, die Ligation dauert bei +15–25 °C nur fünf Minuten.

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Ausschließen von Kontaminationsrisiken: Die rekombinante Expression und die Zuverlässigkeit und Empfindlichkeit der Qualitätskontrolltests gewährleisten hohe Reinheit.
• Eine kostengünstige Lösung als Ersatz für Ihre aktuell genutzten Phosphatasen: rAPid Alkalische Phosphatase erbringt dieselbe Leistung wie Alkalische Phosphatase von der Garnele oder Alkalische Phosphatase vom Rind.
• Ausschließen des Risikos von Krankheiten tierischen Ursprungs: Expression in Pichia pastoris gewährleistet Einheitlichkeit und Sicherheit.
• Vorteil der raschen Hitzeinaktivierung: rAPid Alkalische Phosphatase ist bei einer Temperatur von 75 °C nach nur 2 Minuten inaktiviert.
• Einheitliche Leistung: rAPid Alkalische Phosphatase weist im Vergleich zu anderen alkalischen Phosphatasen eine ausgezeichnete Stabilität während der Lagerung auf.

Verpackung

1 Kit mit 2 Komponenten

Qualität

Alle Chargen rAPid Alkalische Phosphatase werden gemäß den aktuellen Qualitätskontrollverfahren auf die Abwesenheit von Desoxyribonukleasen sowie auf Nicking-Aktivitäten getestet.

Einheitendefinition

Eine Einheit rAPid Alkalische Phosphatase entspricht der Enzymaktivität, die 1 Mol 4-Nitrophenylphosphat in einer Minute bei +37 °C unter Assay-Bedingungen hydrolysiert.

Volumenaktivität: 1 U/μl

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Nur Kit-Komponenten

• rAPid Alkaline Phosphatase Buffer 10x concentrated
• rAPid Alkaline Phosphatase 1 U/μl

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash