APMB-RO

Alkalische Phosphatase

solution, from bovine (calf) intestine, 2 units/μg protein, optimum pH 7.5-9.5

• Synonym(e): ALP, CAP, CIAP, Orthophosphorische Monoester-Phosphohydrolase, Phosphatase aus Kalbsinnereien, cip
• UNSPSC Code: 12352204
• EG-Nummer: 3.1.3.1 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.54
• Specific activity: 2 units/μg protein
• Biological source: bovine (calf) intestine

Eigenschaften

• biological source: bovine (calf) intestine
• form: solution
• specific activity: 2 units/μg protein
• packaging: pkg of 1,000 U (10713023001 [1 U/μl]), pkg of 1,000 U (11097075001 [20 U/μl])
• manufacturer/tradename: Roche
• parameter: 37 °C optimum reaction temp.
• optimum pH: 7.5-9.5
• shipped in: wet ice
• storage temp.: 2-8°C

Beschreibung

General description

Alkalische Phosphatase (ALP) ist ein Glykoprotein, das ubiquitär exprimiert wird. Dieses Enzym ist an die Zellmembran gebunden. Die Aktivierung von ALP erfordert wesentliche Co-Faktoren wie Zink und Magnesium. Alkalische Phosphatase katalysiert die Entfernung von Phosphatgruppen aus verschiedenen phosphorylierten Verbindungen.[1] Alkalische Phosphatase aus Kalbsinnereien hydrolysiert 5′-Monophosphatgruppen von DNA wie RNA. Sie kann auch 5′-Diphosphat- und 5′-Triphosphatgruppen von RNA hydrolysieren. Daher ist intestinale ALP eines der am häufigsten bei der molekularen Klonierung verwendeten Enzyme.

Application

Dieses Präparat alkalischer Phosphatase aus Kalbsinnereien dient dazu, 5′-terminale Phosphate aus DNA oder RNA und immungefällten RNA-Proben zu entfernen.[2][3][4][5]
Hinweis: Das Präparat 11097075001 enthält das Enzym in hoher Konzentration (20 U/μl) und ist daher besonders für Großversuche geeignet. Das Präparat 10713023001 enthält das Enzym in niedrigerer Konzentration (1 U/μl) und empfiehlt sich daher besonders für kleine Experimente.

Physical form

10713023001: Enzymlösung (1 U/μl) in Speicherpuffer, pH 7,6 (20 °C)

11097075001: Enzymlösung (20 U/μl) in Speicherpuffer, pH 7,6 (20 °C)

Preparation Note

Arbeitslösung: Lagerpuffer: 25 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl₂, 0,1 mM ZnCl₂, Glycerin 50 % (v/v), pH 7,6 (4 °C).
Lagerbedingungen (Arbeitslösung): Lösungen (1 bis 5 U/μl) von AP in molekularbiologischer Qualität im Speicherpuffer sind bei 2 bis 8 °C 17 Monate stabil.
Stärkere Verdünnungen (~0,01 U/μl) sollten täglich frisch hergestellt und bei 2 bis 8 °C aufbewahrt werden.
Verhindert die Selbstligation von Vektoren bei der Klonierung
Wenn einem linearisierten Vektor kein 5′-Phosphat zur Verfügung steht, kann er nicht an sich selbst binden oder Konkatamere bilden, die mehrere Kopien des Vektors enthalten. Daher besteht das Produkt der Ligationsreaktion vorwiegend aus rekombinanter DNA (Vektor + eingefügte DNA) anstatt wiederverknüpfter Plasmide.
Inaktivierung: Der Reaktionsmischung 1/10 Volumen EGTA hinzufügen und bei +65 °C 10 Minuten inkubieren. Für eine vollständige Inaktivierung des Enzyms die Mischung mit Phenol/Chloroform/Isoamylalkohol extrahieren, um alle Proteine zu entfernen.

Other Notes

AP ist ein zinkhaltiges Enzym mit 4 Zinkatomen pro Molekül (Efstradiatis, 1977).

Eine Einheit alkalische Phosphatase entspricht der Enzymaktivität, die bei +37 °C in 1 Minute 1 μmol 4-Nitrophenylphosphat unter Assay-Bedingungen hydrolysiert.


Hinweis: Laut Moessner et al. entsprechen 5 Einheiten alkalische Phosphatase (+37 °C; Diethanolaminpuffer) 1 Einheit alkalische Phosphatase (+25 °C; Glycin/NaOH-Puffer).

Umrechnung der Einheit: Ca. 3,6 E (MB-Qualität AP)


[+37 °C, 4-NPP als Substrat, Diethanolamin als Puffer, pH 9,8] = 1 E [+25 °C, 4-NPP als Substrat, Glycin als Puffer, pH 10,5].

Volumenaktivität: 20 U/μl für das Präparat 11097075001. 1 U/μl für das Präparat 10713023001.

Für den allgemeinen Laborgebrauch.

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1
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