ELONG-RO

Expand^™ Long Template PCR-System

suitable for PCR, optimum reaction temp. 68 °C

• Synonym(e): Long Range-PCR, Long Template-PCR
• UNSPSC Code: 41106300
• EG-Nummer: 2.7.7.7 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• usage: sufficient for ≤190 reactions (11681842001), sufficient for ≤38 reactions (11681834001), sufficient for ≤950 reactions (11759060001)
• packaging: pkg of 3,600 U (11759060001 [10x360 U]), pkg of 150 U (11681834001), pkg of 720 U (11681842001 [2x360 U])
• manufacturer/tradename: Roche
• parameter: 68 °C optimum reaction temp.
• technique(s): PCR: suitable
• storage temp.: −20°C

Beschreibung

General description

Das Expand Long Template PCR-System ist ein Enzymgemisch, das eine thermostabile Taq DNA Polymerase und eine thermostabile DNA-Polymerase mit Korrekturleseaktivität enthält. Dieses leistungsstarke Polymerasegemisch erzeugt eine hohe Ausbeute an PCR-Produkt aus genomischer DNA. Das Expand Long Template PCR-System ermöglicht die Amplifikation von DNA-Fragmenten bis zu 20 kb aus humaner genomischer DNA und 40 kb aus λDNA.
Das Expand Long Template PCR-System kopiert DNA dreimal genauer als Taq DNA Polymerase.
Fehlerhafte Einbauten führen dazu, dass die Taq DNA Polymerase vom DNA-Strang abfällt. Die 3′→ 5′ Exonuklease-Aktivität der Korrekturlese-Polymerase-Reaktionsmischung amplifiziert die DNA dreimal genauer als die Taq DNA Polymerase alleine.
Long PCR-Produkte erfordern einen Spezialpuffer und ein optimiertes Protokoll. Dieses Kit enthält drei Puffer für die Amplifikation von Fragmenten von 0,5 bis 9 kb, 9 bis 12 kb und mehr als 12 kb. Um eine hohe Template-Qualität zu erzielen, wird die Verwendung des High Pure Template Preparation-Kits von Roche zur Herstellung eines genomischen DNA-Templates empfohlen.

Application

Der Hauptanwendungsbereich des Expand Long Template PCR-Systems ist die genaue Amplifikation sehr langer Target-Sequenzen, auch aus genomischer DNA. Dieses optimierte Enzymgemisch und das speziell entwickelte Set aus drei Puffern wird verwendet, um PCR-Produkte mit einer Länge von 5 bis 20 kb Länge zu erzeugen.
Das Expand Long Template PCR-System der 1. Generation wird für lange und genaue PCR-Reaktionen gewählt. Dieses optimierte Enzymgemisch und das speziell entwickelte Set aus drei Puffern wird verwendet, um PCR-Produkte mit einer Länge von 5 bis 20 kb zu erzeugen. Dieses Produkt wird verwendet für:

• PCR[1]
• RT-PCR oder Long Range-PCR[2][3]
• Amplifikation großer Fragmente
• Genomkartierungen und -sequenzierungen
• Contig-Konstruktionen
• Charakterisierungen geklonter Sequenzen in Lambda-Phagen oder Kosmiden
• Schnelle Ermittlung und Klonierung kompletter Gene aus genomischer DNA- oder einer cDNA-Sequenz als Ausgangsmaterial

Als wirtschaftliche Alternative empfehlen wir ein Update auf die 2. Generation Expand Long Range, dNTPack.
Das Expand 20kb^PLUS PCR-System, dNTPack wird für Amplikongrößen zwischen 20 und 35 kb empfohlen.

Features and Benefits

Das Expand Long Template PCR-System eignet sich besonders für die Genomkartierung und -sequenzierung, Contig-Konstruktionen, die Charakterisierung geklonter Sequenzen in Lambda-Phagen oder Kosmiden sowie Klonierung und Analyse eukaryotischer Gene.

• Amplifizierung längerer Templates: Dieses Set aus drei Puffern amplifiziert Produkte zwischen 5 und 20 kb.
• Es werden damit höhere Ausbeuten und eine 3-fach höhere Genauigkeit im Vergleich zu Taq DNA Polymerase erreicht.
• Verbessern der PCR: Mehr PCR-Produkt mit voller Länge ist für nachgelagerte Prozesse ideal.

Packaging

1 Kit mit 4 Komponenten

Preparation Note

Arbeitskonzentration: Die optimale Enzymkonzentration variiert zwischen 0,5 und 5,0 U pro 50 μl Reaktion. Die Standard-Enzymkonzentration beträgt 3,75 U pro 50 μl Reaktion.

Analysis Note

Jede Charge wird mit humangenomischer DNA und spezifischen Primern für ein 9 kb-, 12 kb- und 15 kb-Fragment einem PCR-Funktionstest unterzogen. Das Enzymgemisch wird auf die Abwesenheit jeglicher kontaminierender Aktivitäten einschließlich Endo- oder Exonukleasen und Nicking-Aktivität gemäß den aktuellen Qualitätskontrollverfahren getestet.

Other Notes

Nur für die Life Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Volumenaktivität: 5 U/μl

Legal Information

Die Verwendung dieses Produkts unterliegt US-Patentansprüchen und entsprechenden Patentansprüchen außerhalb der USA. Der Erwerb dieses Produkts umfasst eine beschränkte, nicht übertragbare Immunität gegenüber Rechtsschutzverfahren gemäß den oben genannten Patentansprüchen für den ausschließlichen Gebrauch dieser Menge des Produktes für eigene interne Forschungsanwendungen des Käufers. Es wird weder ausdrücklich noch implizit oder durch Rechtsverwirkung ein Rechtsanspruch unter anderen Patentsprüchen, ein Rechtsanspruch zur Erbringung kommerzieller Leistungen jeglicher Art übertragen, einschließlich, aber nicht beschränkt auf, das Berichten der Ergebnisse aus den Aktivitäten des Käufers gegen Entgelt oder andere kommerzielle Gegenleistungen. Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke vorgesehen. Diagnostische Verwendungen nach Roche-Patentansprüchen erfordern eine gesonderte Lizenz von Roche. Weitere Informationen zum Erwerb von Lizenzen erhalten Sie durch Kontaktaufnahme mit dem Direktor der Lizenzierungsabteilung, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.</ br>HINWEIS AN DEN KÄUFER: BESCHRÄNKTE LIZENZ<br />Die Verwendung dieses Produkts unterliegt dem US-Patent Nr. 6,127,155 und den entsprechenden Patentansprüchen außerhalb der USA.  Der Erwerb dieses Produkts umfasst eine beschränkte, nicht übertragbare Immunität gegenüber Rechtsschutzverfahren gemäß den oben genannten Patentansprüchen für den ausschließlichen Gebrauch dieser Menge des Produktes für eigene interne Forschungsanwendungen des Käufers.  Es wird weder ausdrücklich noch implizit oder durch Rechtsverwirkung ein Rechtsanspruch unter anderen Patentsprüchen, ein Rechtsanspruch zur Erbringung kommerzieller Leistungen jeglicher Art übertragen, einschließlich, aber nicht beschränkt auf, das Berichten der Ergebnisse aus den Aktivitäten des Käufers gegen Entgelt oder andere kommerzielle Gegenleistungen.  Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke vorgesehen. Human- oder veterinärdiagnostische Verwendungen nach Roche-Patentansprüchen erfordern eine gesonderte Lizenz von Roche.  Alle anderen Verwendungen, die keine interne Forschung und keine human- und veterinärdiagnostische Verwendungen nach Roche-Patentansprüchen sind, erfordern eine gesonderte Lizenz von Thermo Fisher Scientific. Weitergehende Informationen zum Erwerb von Lizenzen von Roche erhalten Sie von der Lizenzabteilung von Roche Molecular Systems, Inc., 4300 Hacienda Drive, Pleasanton, California 94588, USA oder Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Straße 116, 68305 Mannheim, Deutschland.  Weitere Informationen zum Erwerb von Lizenzen von Thermo Fisher Scientific erhalten Sie von der Lizenzabteilung von  Thermo Fisher Scientific, 5791 Van Allen Way, Carlsbad, California 92008, USA.

Expand is a trademark of Roche

Nur Kit-Komponenten

• Expand Long Template Enzyme Mix
• Expand Long Template Buffer 1, with 17.5 mM MgCl₂ 10x concentrated
• Expand Long Template Buffer 2, with 27.5 mM MgCl₂ 10x concentrated
• Expand Long Template Buffer 3, with 27.5 mM MgCl₂ and detergents 10x concentrated

Sicherheitshinweise

• hcodes: H412
• pcodes: P273 - P501
• Hazard Classifications: Aquatic Chronic 3
• Lagerklasse: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 2
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