Traditional DNA/RNA isolation kits can be used to prepare genomic material for sequencing (RNA-seq, scRNA-seq, WGS, CHIP-seq etc). For some applications with large organoids, tissue specific DNA/RNA extraction kits are recommended. TRI Reagent (T9424) can be added to the dissociated organoids before RNA extraction and can be stored at -80 °C until future use.
SCC111
R-Spondin1-exprimierende 293T-Zelllinie
Human
Synonym(e):
RSPO1-expressing 293T cells
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Über diesen Artikel
UNSPSC Code:
41106514
NACRES:
NA.81
eCl@ss:
32011203
Biological source:
human
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R-Spondin1-exprimierende 293T-Zelllinie, The R-Spondin1-Expressing 293T cell line produces RSPO1, a critical protein used to establish 3D organoid cultures from stomach, small intestine, colon, pancreas, and liver sources.
biological source
human
Quality Level
shipped in
dry ice
storage temp.
-140 to -196°C
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|---|---|---|---|
| biological source human | biological source human | biological source human | biological source mouse |
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| Quality Level 100 | Quality Level - | Quality Level - | Quality Level - |
General description
3D-Organoidkultursysteme werden zunehmend als leistungsstarke Tools für Studien humaner Erkrankungen eingesetzt. Organoide stellen die gewebespezifische Nischenmikroumgebung besser dar. R-Spondin-1 (RSPO1) ist einer der am häufigsten eingesetzten Nischenfaktoren zum Kultivieren von 3D-Organoiden. Der erste veröffentlichte Bericht eines Organoidkultursystems, das Langzeitüberleben und mehrstufige Differenzierung von Darmstammzellen (ISC) fördern konnte und in Maus-Rspo1 als ein kritischer Faktor eingesetzt wurde[1]. Seither wurde R-Spondin1 verwendet, um Organoidkulturen aus Magen, Dünndarm, Darm, Pankreas und Leber von Maus und Mensch zu etablieren[2] [1].
RSPO1 ist ein Darmwachstumsfaktor, der als potenter Aktivator des Wnt/beta-Catenin-Signalwegs dient, indem er an Leucin-reiche Repeat–haltige G-Protein–gekoppelte Rezeptoren (LGR), die in Gewebestammzellen exprimiert werden, bindet. RSPO1 bindet auch an die transmembranen E3-Ubiquitinligasen RNF43 und ZNRF3, löst ihre Internalisierung und somit die Wnt-Signalisierung aus.
Die 293T-Zelllinie wird stabil transfiziert, um Maus-R-Spondin1-Protein zu exprimieren, das mit einem HA-Epitop-Tag am N-Terminus und einer Maus-IgG2α-Fc-Region am C-Terminus markiert ist. Die R-Spondin1-exprimierende 293T-Zelllinie kann zum Erzeugen von entweder aufgereinigtem Rspo1 oder Rspo1-konditionierten Medien eingesetzt werden. Die Fc-Region und HA-Tags ermöglichen eine einfache Aufreinigung und Charakterisierung. Die Zelllinie ist nicht die vom Kuo-Labor publizierte Zelllinie, sondern eine verwandte Zelllinie, die im selben Labor mit dem Referenzprotokoll entwickelt wurde.
Die 293T-Zelllinie wird stabil transfiziert, um Maus-R-Spondin1-Protein zu exprimieren, das mit einem HA-Epitop-Tag am N-Terminus und einer Maus-IgG2α-Fc-Region am C-Terminus markiert ist. Die R-Spondin1-exprimierende 293T-Zelllinie kann zum Erzeugen von entweder aufgereinigtem Rspo1 oder Rspo1-konditionierten Medien eingesetzt werden. Die Fc-Region und HA-Tags ermöglichen eine einfache Aufreinigung und Charakterisierung. Die Zelllinie ist nicht die vom Kuo-Labor publizierte Zelllinie, sondern eine verwandte Zelllinie, die im selben Labor mit dem Referenzprotokoll entwickelt wurde.
Application
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Forschungskategorie
Zellkultur
Zellkultur
Biochem/physiol Actions
Epithelzellen
Preparation Note
In Flüssigstickstoff aufbewahren. Die Zellen können nach dem ersten Auftauen für mindestens 10 Passagen kultiviert werden, ohne dass die Expression und Funktionalität der Zellmarker wesentlich beeinträchtigt wird.
Analysis Note
• Jedes Fläschchen enthält ≥1 x 10⁶ lebensfähige Zellen.
• Die Zellen werden mittels PCR negativ auf HPV-16, HPV-18, Hepatitis A, B, C, Herpesvirus Typ 6, 7, 8 sowie HIV-1- und HIV-2-Viren getestet.
• Die Zellen weisen keine Mykoplasmen-Kontamination auf.
• Jede Zellpartie wird mittels STR-Analyse genotypisiert, um die eindeutige Identität der Zelllinie zu verifizieren.
• Die Zellen werden mittels PCR negativ auf HPV-16, HPV-18, Hepatitis A, B, C, Herpesvirus Typ 6, 7, 8 sowie HIV-1- und HIV-2-Viren getestet.
• Die Zellen weisen keine Mykoplasmen-Kontamination auf.
• Jede Zellpartie wird mittels STR-Analyse genotypisiert, um die eindeutige Identität der Zelllinie zu verifizieren.
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James Clinton et al.
Current protocols in cell biology, 82(1), e66-e66 (2018-09-29)
Organoids are primary patient-derived micro tissues grown within a three-dimensional extracellular matrix that better represents in vivo physiology and genetic diversity than existing two-dimensional cell lines. Organoids rely on the self-renewal and differentiation of tissue-resident stem cells that expand in
Akifumi Ootani et al.
Nature medicine, 15(6), 701-706 (2009-04-29)
The in vitro analysis of intestinal epithelium has been hampered by a lack of suitable culture systems. Here we describe robust long-term methodology for small and large intestinal culture, incorporating an air-liquid interface and underlying stromal elements. These cultures showed
Toshiro Sato et al.
Science (New York, N.Y.), 340(6137), 1190-1194 (2013-06-08)
Recent examples have highlighted how stem cells have the capability to initiate morphogenesis in vitro; that is, to generate complex structures in culture that closely parallel their in vivo counterparts. Lgr5, the receptor for the Wnt-agonistic R-spondins, marks stem cells
Christian Moya Gamboa et al.
Cells, 10(12) (2021-12-25)
The liver is among the principal organs for glucose homeostasis and metabolism. Studies of liver metabolism are limited by the inability to expand primary hepatocytes in vitro while maintaining their metabolic functions. Human hepatic three-dimensional (3D) organoids have been established
Toshiro Sato et al.
Cell, 161(7), 1700-1700 (2015-06-20)
Tissue stem cells require unique niche microenvironments. In the presence of specific combinations of niche factors, mouse and human epithelial tissues from stomach, small intestine, colon, pancreas duct, and liver bile duct efficiently form stereotypic organoids. The platform of epitheloid
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Global Trade Item Number
| SKU | GTIN |
|---|---|
| SCC111 | 04054839226953 |
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How Do you Extract RNA/DNA from Organoids in Cultured in Matrigel?
1 answer-
Helpful?
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How do you stain organoids with antibodies?
1 answer-
Organoids can be stained with antibodies for immunocytochemical (ICC)/Immunohistochemical (IHC) analysis using either whole-mount or paraffin embedding/sectioning techniques. It is critical to use antibodies prequalified for organoid analysis.
Helpful?
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How are organoids cultured?
1 answer-
Once isolated, organoids are cultured in specialized media embedded in a rich extracellular matrix (ECM) basement membrane extract hydrogel such as Growth Factor Reduced Matrigel. Media is replenished every other day and cells are passaged once per week (7-12 days) before cells become too large or necrotic. Cells can be passaged in either small clump fragments or as single cells using mechanical dissociation/enzyme-free passaging reagents. Depending on organoid type and confluency, split ratios of roughly 1:3-1:4 can be used when passaging organoids. For sensitive organoid types, ROCKi (Y27632) (SCM075) can be added during passaging to help in promoting cell viability.
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What is the selection marker that is used in your RS Spondin expressing 293 cells. Is it neomycin resistance? What antibiotic should be used for selection pressure? Geneticin/G418?
1 answer-
The cell line is selected by zeocin. It is not necessary to add zeocin to culture medium as the cell line is stable.
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