MABS1291

Anti-Cas9-Antikörper, C-Term., Klon 10C11-A12

clone 10C11-A12, from mouse

• Synonym(e): CRISPR-associated endonuclease Cas9/Csn1, SpyCas9
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Eigenschaften

• Biologische Quelle: mouse
• Qualitätsniveau: 100
• Antikörperform: purified antibody
• Antikörper-Produkttyp: primary antibodies
• Klon: 10C11-A12, monoclonal
• Speziesreaktivität: bacteria
• Methode(n): immunocytochemistry: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; western blot: suitable
• Isotyp: IgG1κ
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NP_269215
• UniProt-Hinterlegungsnummer: Q99ZW2
• Versandbedingung: wet ice
• Posttranslationale Modifikation Target: unmodified

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

CRISPR-assoziierte Endonuklease Cas9/Csn1 (UniProt Q99ZW2; auch als SpyCas9 bezeichnet) wird vom Streptococcus-pyogenes-M1-Serotyp-Gen Cas9 (auch bekannt als csn1) (Gen-ID 901176) kodiert. Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPRs) sind DNA-Loci mit kurzen Wiederholungen von Basensequenzen, die komplementär zu den früheren mobilen Elementen sind und sich gegen eindringende Nukleinsäuren richten. Auf jede Wiederholung folgen kurze Segmente von Spacer-DNA aus früheren Expositionen gegenüber einem Virus. Cas9 ist eine essentielle Endonuklease im CRISPR-Immunsystem des Streptococcus-pyogenes-Serotyps M1, das Resistenz gegen fremde genetische Elemente wie Plasmide und Phagen bewirkt. CRISPR-Cluster werden zu CRISPR-RNA (crRNA) transkribiert und verarbeitet. In CRISPR-Systemen vom Typ II werden für die richtige Verarbeitung von prä-crRNA transkodierte kleine RNA (tracrRNA), endogene Ribonuklease 3 (rnc) und Cas9 benötigt. Das lineare oder zirkuläre dsDNA-Ziel von Cas9/crRNA/tracrRNA wird endonukleolytisch komplementär zum Spacer gespalten. Der nicht zur crRNA komplementäre Zielstrang wird zunächst endonukleolytisch abgetrennt und dann 3′-5′ exonukleolytisch gekürzt.

Spezifität

Klon 10C11-A12 erkennt ein Epitop, das sich in der C-terminalen Region von Cas9 befindet.

Immunogen

His-markiertes rekombinantes C-terminales Fragment von Cas9 aus S. pyogenes.

Anwendung

Anti-Cas9-Antikörper, C-Term. Klon 10C11-A12, ist ein Antikörper gegen Cas9 zur Verwendung in Immunzytochemie, Immunpräzipitation und Western Blot.

Immunzytochemische Analyse: Mit 33,5 µg/ml aus einer repräsentativen wurde die Doxycyclin-induzierte Expression des exogen transfizierten S. pyogenes Cas9-Konstrukts unter der Kontrolle des PTight-(Tet-ON-)Promotors durch fluoreszierende immunzytochemische Färbung von Methanol-fixierten, Aceton-permeabilisierten HeLa-Transfektanten nachgewiesen (mit freundlicher Genehmigung von Dr. Stefan Schuechner und Dr. Egon Ogis, Medizinische Universität Wien, Österreich).
Analyse mittels Immunpräzipitation: Mit 13,4 µg aus einer repräsentativen Charge wurde exogen exprimiertes Cas9 in 250 µg Lysat aus transfizierten, nicht aber aus nicht-transfizierten HeLa-Zellen immunpräzipitiert (mit freundlicher Genehmigung von Dr. Stefan Schuechner und Dr. Egon Ogris, Medizinische Universität Wien, Österreich).
Western Blot-Analyse: Mit 1,675 µg/ml aus einer repräsentativen Charge wurde exogen exprimiertes Cas9 in 20 µg Lysat aus transfizierten, nicht aber aus nicht-transfizierten HeLa-Zellen nachgewiesen (mit freundlicher Genehmigung von Dr. Stefan Schuechner und Dr. Egon Ogris, Medizinische Universität Wien, Österreich).
Western Blot-Analyse: Der Überstand einer Hybridom-Kultur des Klons 10C11-A12 wies die durch Doxycyclin-Behandlung induzierte Expression eines FLAG-markierten Cas9-Konstrukts unter der Kontrolle des PTight-Promotors in einer von HeLa-Zellen abstammenden Tet-ON-Zelllinie nach (mit freundlicher Genehmigung von Dr. Stefan Schuechner und Dr. Egon Ogris, Medizinische Universität Wien, Österreich).

Qualität

Beurteilt mittels Western Blot an Lysat von Cas9-transfizierten HeLa-Zellen.

Western-Blot-Analyse: 0,5 µg/ml dieses Antikörpers wiesen das exogen exprimierte Cas9 in 10 µg Lysat von transfizierten HeLa-Zellen nach.

Zielbeschreibung

~158 kDa beobachtet. 158,4 kDa berechnet.

Physikalische Form

Format: Aufgereinigt

Sonstige Hinweise

Konzentration: Die Konzentration entnehmen Sie bitte dem chargenspezifischen Datenblatt.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable