ECM558

QCM Tumorzelltransendothel-Migrations-Assay (kolorimetrisch, 24 Assays)

• UNSPSC Code: 12352207
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32161000

Eigenschaften

• Quality Level: 100
• manufacturer/tradename: Chemicon^®, QCM
• technique(s): cell based assay: suitable
• detection method: colorimetric

Beschreibung

General description

Die Tumormetastase ist eine mehrstufige Kaskade. Damit Tumorzellen von einem Primärtumor an entfernte Stellen migrieren können, müssen sie durch die Basalmembran und in die Blutgefäße eindringen (Intravasation), im Blutkreislauf zirkulieren, während des Transports überleben und anschließend aus dem Blutgefäß migrieren (Extravasation), um Mikrometastasen zu bilden. Das Eindringen von zirkulierenden Tumorzellen in das Endothel ist ein wesentlicher Schritt der Tumormetastase.

Ein quantitativer Assay für die Tumortransendothelmigration wurde mit einem modifizierten Boyden-Kammer-System , beschrieben (Okada, 1994; Li, 1999; Laferriere, 2001). Das Boyden-Kammer-System ist ein Zwei-Kammern-System mit einer porösen Membran, die eine Grenzfläche zwischen diesen beiden Kammern darstellt. Endothelzellen werden auf der porösen Membran kultiviert, die mit einem Protein der extrazellulären Matrix (EZM) beschichtet ist. Eine Tumorzellsuspension wird über die Endothelmonoschicht gegeben. Die Invasion von Tumorzellen durch das Endothel wird durch Messen der Anzahl von Zellen, die in die untere Kammer migrieren, bestimmt.

Millipore QCM Tumorzelltransendothel-Zellmigrations-Assay – kolorimetrisch stellt ein effizientes Modell zum Analysieren der Fähigkeit von Tumorzellen dar, in das Endothel einzudringen. Der Assay ist mit einem 8-μm-Porengröße-Zellkultureinsatz konzipiert, der sich für die meisten Krebszelllinien eignet. Die Oberseite des Zellkultureinsatzes ist mit Fibronektin beschichtet, um die optimale Anhaftung und das Wachstum von Endothelzellen zu fördern. Der Assay ermöglicht es Forschenden, die Invasivität verschiedener Tumorzelllinien zu vergleichen, um die Wirkungen verschiedener an dem Prozess beteiligten Faktoren zu beurteilen.

Vorbeschichtete Zellkultureinsätze werden mit dem Millipore QCM Tumorzelltransendothel-Zellmigrations-Assay bereitgestellt, um die Assay-Dauer signifikant zu verkürzen. Zusätzlich ermöglicht der Assay die quantitative Analyse der Tumorzellmigration. Nach der Inkubation von Tumorzellen mit der Endothelzellschicht werden invasive Tumorzellen gefärbt und quantifiziert. Entgegen der traditionellen Boyden-Methode wird das Färbemittel mit Extraktionspuffer eluiert, auf eine Mikrotiterplatte übertragen und spektrophotometrisch gemessen. (Vor der Elution können Forschende die Zellen einzeln zählen, falls gewünscht.) Die spektrophotometrische Absorption korreliert mit der Zellmigration.

Application

Berechnung der Ergebnisse

Ergebnis Assay-Ergebnisse können mit einem Balkendiagramm grafisch veranschaulicht werden, um Werte für die optische Dichte (OD) bei ~570 nm darzustellen.

Ein typisches Tumorzellendothel-Migrationsexperiment wird mit einer Negativkontrolle verglichen. Negativkontrollkammern, die nur HUVEC enthalten, dienen dem Bestimmen der Menge von HUVEC, die durch die Membran migrieren. Die Zellmigration in diesen Kammern ist in der Regel gering, da es auf der unteren Seite der Membran keine EZM gibt, um die Endothelmigration zu unterstützen, und diese Kammern werden in der Regel als „Blanks“ für die Dateninterpretation verwendet. So kann die Migration in Test-Wells als der Wert der Tumortransendothelmigration minus den in der Nur-HUVEC-Kontrolle veranschaulichten Migrationsmenge beschrieben werden.

Eine zusätzliche Migration kann in Test-Wells durch die Zugabe von Zytokinen oder anderen Wirkstoffen eingeleitet oder gehemmt werden.
Die folgenden Abbildungen zeigen typische Migrationsergebnisse. Die Daten links sollen nur als Referenz dienen. Diese Daten sollten nicht verwendet werden, um tatsächliche Assay-Ergebnisse zu interpretieren.

Dieser QCM Tumorzelltransendothel-Zellmigrations-Assay – kolorimetrisch stellt ein effizientes Modell zum Analysieren der Fähigkeit von Tumorzellen dar, in das Endothel einzudringen.

Forschungskategorie
Apoptose & Krebs

Packaging

24 Assays

Preparation Note

TNFα sollte bei -20 °C aufbewahrt werden. Alle anderen Komponenten sollten bei 2 bis 8 °C aufbewahrt werden. Das Verfallsdatum entnehmen Sie bitte dem Kit-Etikett.

Other Notes

1. Migrationstestplatte: (Artikelnr. CS202627) Zwei 24-Well-Kulturplatten mit jeweils 12 mit humanem Fibronektin beschichteten Zellkultureinsätzen (8 μm Porengröße), ausreichend für die Bewertung von 24 Prüfproben
2 TNFα: (Artikelnr. 2004167) Ein Röhrchen – 20 μl zu 0,1 mg/ml.
3. Zellfärbelösung*: (Artikelnr. 20294) Ein Fläschchen – 10 ml
4. Extraktionspuffer: (Artikelnr. 20295) Ein Fläschchen – 10 ml
5. 24-Well-Farbextraktionsplatte: (Artikelnr. 2005871) Eine Platte.
6. 96-Well-Farbquantifizierungsplatte: (Artikelnr. 2005870) Eine Platte.
7. Tupfer: (Artikel-Nr. 10202) je 50 Stück.
8: Pinzette: (Artikelnr. 10203) 1 Stück.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS02,GHS07
• signalword: Danger
• hcodes: H225,H319
• pcodes: P210 - P233 - P240 - P241 - P242 - P305 + P351 + P338
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Flam. Liq. 2
• Lagerklasse: 3 - Flammable liquids
• wgk: WGK 3