T1426

Tripsina from bovine pancreas

TPCK Treated, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥10,000 BAEE units/mg protein

• Sinónimos: Serine Protease 1
• Número de CAS: 9002-07-7
• Comisión internacional de enzimas: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• EC Number: 232-650-8
• MDL number: MFCD00082094
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54

Propiedades

• biological source: bovine pancreas
• Quality Level: 300
• grade: Proteomics Grade
• form: essentially salt-free, lyophilized powder
• specific activity: ≥10,000 BAEE units/mg protein
• mol wt: 23.8 kDa
• solubility: hydrochloric acid: soluble 1 mM
• application(s): diagnostic assay manufacturing
• foreign activity: Chymotrypsin ≤0.1 BTEE units/mg protein
• storage temp.: −20°C

Descripción

Application

Para la digestión de los péptidos con tripsina, utilice una proporción de aproximadamente 1:100 a 1:20 de tripsina:péptido. La utilización habitual de este producto es la separación de las células adherentes de una superficie de cultivo. La concentración necesaria de tripsina para separar las células de su sustrato depende fundamentalmente del tipo de célula y de la edad del cultivo. También se han utilizado tripsinas para la re-suspensión de células durante el cultivo celular, en investigación en proteómica para la digestión de proteínas y en varias digestiones en gel. Otras aplicaciones son la evaluación de la cristalización mediante técnicas de membrana y en un estudio para determinar que las tasas de plegado y los rendimientos de las proteínas pueden limitarse por la presencia de trampas cinéticas.

Biochem/physiol Actions

La tripsina rompe los péptidos por el lado C-terminal de los restos de lisina y de arginina. La velocidad de hidrólisis de esta reacción se reduce si a cada lado del punto de rotura hay un residuo ácido, y la hidrólisis se interrumpe si en el lado carboxilo del sitio de ruptura hay un resto de prolina. El pH óptimo de actividad de la tripsina es 7-9. La tripsina también puede actuar rompiendo las uniones éster y amida de los derivados sintéticos de aminoácidos. Se añade EDTA a las disoluciones de tripsina como agente quelante que neutraliza los iones de calcio y de magnesio, los cuales ocultan los enlaces peptídicos sobre los que actúa la tripsina. La eliminación de esos iones aumenta la actividad enzimática.

Los inhibidores de las proteasas de serina, como DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF y la aprotinina, entre otros, inhibirán la tripsina.

Components

La tripsina consiste en una sola cadena polipeptídica de 223 restos de aminoácidos, producida por la eliminación del hexapéptido N-terminal del tripsinógeno, que es hidrolizado en el enlace peptídico entre Lys e Ile. La secuencia de aminoácidos esta entrecruzada por 6 puentes disulfuro. Esta es la forma nativa de la tripsina, la beta-tripsina. La BETA-tripsina puede autolisarse, rompiendo en el resto Lys - Ser, para producir alfa-tripsina. La tripsina es miembro de la familia de proteasas de serina.

Caution

Disoluciones en HCl 1 mM son estables durante 1 año en alícuotas y conservadas -20°C. La presencia de Ca²⁺ también disminuirá la autólisis de la tripsina y mantendrá su estabilidad en disolución. La tripsina retendrá también la mayor parte de su actividad en urea 2,0 M, HCl de guanidina 2,0 M o SDS al 0,1 % (p/v).

Unit Definition

Una unidad BAEE producirá un A₂₅₃ de 0,001 por minuto a pH 7,6 y 25°C utilizando BAEE como sustrato.

Preparation Note

Soluble en HCl 1 mM a 1 mg/ml.
También está tratada con TPCK y dializada. El tratamiento con L-1-tosilamida-2-feniletil clorometil cetona (TPCK) reduce la actividad quimiotripsina que suele estar presente en la tripsina.

Información de seguridad

• pictograms: GHS08,GHS07
• signalword: Danger
• hcodes: H315,H319,H334,H335
• pcodes: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Storage Class: 11 - Combustible Solids
• wgk_germany: WGK 1
• ppe: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves