樣品製備與凝膠電泳故障排除

電流、電線、導線、梳子、洩漏......如此多的麻煩機會。但我們仍然使用凝膠，因為電泳仍然是分離蛋白質的有效方法 - 因此以抗體為基礎的免疫檢測結果可以相當明確。

請點選 Sample Preparation & Gel Electrophoresis 主題，閱讀可能的原因和補救方法：

• No Bands or Gel Front
  
• 樣本滲出井外
  
• 色帶垂直塗抹
• Gel Running Unusually Slowly
  
• 
  
• 蛋白帶太靠近（未完全解決）
• 凝膠最左側和/或最右側的帶扭曲
• 膠帶形成微笑形狀

前方無帶或凝膠
可能原因	Remedy
蛋白質從凝膠上流下	減少凝膠的運行時間。 降低電壓。 確保引線方向正確，因為電泳引線與電源可能接反，導致凝膠向上跑。 增加凝膠的丙烯酰胺百分比。
每孔載入更多蛋白質。 確保每個樣品的蛋白濃度準確。
在通電之前，樣品已從孔中擴散	減少裝載凝膠第一孔與開始電泳之間的時間。如有必要，一次運行較少的凝膠和/或較少的泳道。
SDS 不夠？td valign="top"> 如果沒有足夠的 SDS，蛋白質不會帶負電，也就無法通過細胞。確保 SDS 濃度足夠。

樣品不會沉到井底
Possible Cause	Remedy
增加甘油濃度。

樣品漏出井外
可能原因	Remedy
取出凝膠梳時損壞孔	小心取出凝膠梳，避免損壞孔。上樣品前用電泳緩衝液輕輕沖洗孔，以檢測損壞的孔。
樣品載入過程中損壞的孔	小心載入樣品，確保移液器吸頭不碰到孔的底部或側邊。

頻帶垂直塗抹
可能原因
Incomplete protein solubility blocks proteins from entering the gel <	在製備細胞裂解液時，確保充分的聲化/均質化和離心，以去除微粒物質。
蛋白質降解td valign="top"> 在製備細胞裂解液時加入/增加蛋白酶/磷酸酶抑制劑的濃度。 避免重複冷凍/解凍細胞裂解液和 Western 印跡樣本。
上載太多蛋白質 SDS-PAGE上負載太多蛋白質的影響	減少每孔的蛋白上載量。
增加凝膠運轉時間。
使用新的凝膠。

太多樂團
可能原因	補救方法
蛋白質降解	在製備細胞裂解液時，加入/增加蛋白酶/磷酸酶抑制劑的濃度。 避免重複冷凍/解凍細胞裂解液和 Western 印跡樣本。
確保足夠的 DTT 濃度，可減少二硫鍵。 將 Western blot 樣品載入凝膠前，先在水浴中加熱。

凝膠運行異常緩慢
可能原因	補救方法	補救方法
稀釋緩衝區。
增加凝膠儀器的電壓。

凝膠跑得異常快
可能原因	補救方法
緩衝區太稀釋	濃縮緩衝區。
電流太高	降低凝膠儀器的電壓。

蛋白質帶太接近（未完全解決）
可能原因	補救方法
執行時間不足	延長凝膠的執行時間。
使用梯度凝膠（底部的丙烯酰胺百分比高於頂部），可充分解析更廣尺寸範圍的蛋白質。

凝膠最左側和/或最右側的波段失真
可能原因	補救方法
請勿留空孔。在未使用的孔中加入少量蛋白，以防止對鄰近通道造成邊緣效應。

樂團組成微笑的形狀
Possible Cause	Remedy
過熱 Gel run is "smiling." This is caused by too high a voltage. 這是由於電壓太高所造成的。使用冷凍緩衝液，並將凝膠放置在冷藏室或冰袋中。

PCR 和蛋白質試劑盒

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材料

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