根據 USP 專論，以 HPLC-UV 進行丙酸氟替卡松分析。

Eddy Tan, R&D Scientist

R&D APAC Lab (Singapore)

丙酸氟替卡松

摘要

Purospher^® STAR RP-18e Hibar^® HPLC 色譜柱用於按照 USP 專著檢測丙酸氟替卡松。這是反相等度分離丙酸氟替卡松與丙酸氟替卡松相關化合物 D。

• 實驗
• 結果與討論
• 結論

Introduction

丙酸氟替卡松是一種糖皮質類激素，可作為鼻腔噴霧劑，用於治療打噴嚏、鼻癢或流鼻涕，或其他由花粉熱引起的症狀。它也可以乳霜和軟膏的形式局部使用，以治療皮膚痕癢。

該Purospher^® STAR RP-18e Hibar^® HPLC 色譜柱，250 x 4.6 mm, 5 µm，用于展示按照USP专著检测丙酸氟替卡松的系统适用性标准。

Experimental

Mobile Phase Preparation

• 對於緩衝液，稱取 1.15 g磷酸一铵于1 L容量瓶中，用磷酸调节pH至3.5 ± 0.05。
• 流动相，甲醇、乙腈和缓冲液分别配成50:15:35份。

系統適用性溶液，0.05 mg/mL USP 丙酸氟替卡松解析混合物 RS

• 稱取 ~10 mg USP 丙酸氟替卡松解析混合物 RS 至 100 mL 容量瓶中。
• 加入 ~90 mL 流動相，靜音 15 分鐘。
• 以流動相加至刻度，混勻。
• 用流動相稀釋至 0.05 mg/mL 的濃度。

用於化驗和線性測試的丙酸氟替卡松溶液

• 稱取 ~10 mg 丙酸氟替卡松 CRM 至 100 mL 容量瓶中。
•  加入 ~90 mL 流動相，靜音 15 分鐘。
• 用流動相加至刻度，混勻。
• 在 5 mL 容量瓶中用流動相稀釋至 0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07 mg/mL。

用於檢測的丙酸氟替卡松溶液和相對標準偏差（RSD）：0.04 mg/mL。

丙酸氟替卡松溶液的線性、LOD 和 LOQ：0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07 mg/mL。

柱：	Purospher® STAR RP-18e 5 µm Hibar® RT 250-4.6 mm (1.51456)
偵測：	UV, 239 nm
移動相位：	Methanol:acetonitrile:buffer (50:15：
流速：	1.5 mL/min
壓力下降：	300 bar (or ~4350 psi)
柱溫。:	40 oC
Detector：	UV, 239 nm
注射：	20 µL
樣品：	系統適用性溶液：0.05 mg/mL USP Fluticasone Propionate Resolution Mixture RS in mobile phase (MP) 用於化驗和線性測試的丙酸氟替卡松 CRM 溶液：0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 和 0.07 mg/mL 丙酸氟替卡松溶液於 MP 中

結果與討論

圖 1. 0.05 mg/mL USP 丙酸氟替卡松溶液混合物 RS.

丙酸氟替卡松和丙酸氟替卡松相關化合物 D 的相對保留時間分別為 1.00 和 1.10。

表 1. 0.05 mg/mL USP 丙酸氟替卡松分辨混合物 RS 的丙酸氟替卡松與相關化合物 D 之間的分辨力

注射編號
2.90
2.90
2.90
2.89
2.90
2.90
標準偏差	0.004
RSD	0.15%

系統適用性的驗收標準

解析度：丙酸氟替卡松與丙酸氟替卡松相關化合物 D 之間的 NLT 1.5。

圖 2. 丙酸氟替卡松 0.04 mg/mL 標準溶液。

表 2. 重複注射 0.04 mg/mL 丙酸氟替卡松 CRM 溶液的再現性

注射編號
14.4618
14.4392
14.4089
Injection 4	14.4391
14.4354
14.4369
標準偏差	0.019
RSD	0.13%

標準溶液的驗收標準
相對標準偏差 (RSD)：NMT 2%

表 3. 丙酸氟替卡松的線性、LOD 和 LOQ

Concentration (mg/mL)	平均面積 (mAU*min)
0.0100	3.581
0.0200	7.067
0.0300	10.773
0.0400	14.483
0.0500	17.877
0.0500	17.0601	21.472
0.0701	25.231
STEYX	0.094
Slope	359.88
LOD (mg/mL)	0.00086
LOQ (mg/mL)	0.0026
R2	0.9999

圖 3. 0.01 至 0.07 mg/mL 丙酸氟替卡松溶液的線性關係圖。

結論

Purospher^® STAR RP-18e Hibar

該色谱柱堅固耐用，重複分析的再現性良好（此處未顯示數據）。此外，該柱在 0.01 至 0.07 mg/mL 丙酸氟替卡松之間具有良好的線性，R²為 0.9999。丙酸氟替卡松的檢測限 (LOD) 為 0.86 µg/mL，定量限 (LOQ) 為 2.6 µg/mL。

參考資料

1. USP Monographs, Fluticasone Propionate. USP-NF. Rockville, MD: United States Pharmacopeia. (2022). https://doi.org/10.31003/uspnf_m34220_05_01