人類造血祖細胞 (HPC) 和生長培養基

這些產品在美國、加拿大和部分歐洲國家有售。

• 造血祖細胞培養系統
• 人類 CD34+ 祖細胞培養方案
• Materials for Human Hematopoietic Progenitor Cell Culture

造血幹細胞培養系統

CD34 是一種糖基化的跨膜蛋白，是眾所周知的原始血液和骨髓來源祖細胞的標記，尤其是造血和內皮祖細胞。

PromoCell^® CD34⁺ 祖細胞是從健康捐獻者的臍帶血中分離出來的。CD34⁺ 祖細胞適用於多種研究，以及定向分化為更多的血細胞表型和內皮系。分離出新鮮製備的 CD34⁺ 祖細胞後，立即使用專利的無血清冷凍培養基 Cryo-SFM 進行冷凍保存。解凍後，每個冷凍瓶至少含有 100,000 個存活細胞。

人類 CD34⁺ 祖細胞的培養規範

• 人類造血祖細胞在無血清培養基的擴展

造血祖細胞擴增培養基專為擴增 HPC 而開發，有兩種配方。  這些培養基的套件包括一瓶 Basal Medium 和一小瓶 SupplementMix。

• 造血祖細胞 (HPC) 擴展培養基 DXF  專為原始 HPCs 在完全定義、無異種的培養環境中最大限度地擴展而設計。
• 造血祖細胞培養基（即用型） 是專為造血祖細胞通過分化成更堅定的血細胞系進行擴增而開發的。因此，這種祖細胞培養基適用於以 CFU 為基礎的檢測，例如長期培養啟動細胞 (LTC-IC) 檢測。 這種培養基最適合用於人類原代細胞，但也可用於來自牛卵泡的原代粒細胞 (GC)，以及小鼠原代單核細胞。

注意： 為達到最佳效能，完整的造血祖細胞 (HPC) 擴展培養基 DXF 必須由使用者補充額外的生長因子。Cytokine Mix E 是一種即用型生長因子混合物，可選用於 HPC Expansion Medium DXF。這種不含動物成分的定義配方包含重組人 TPO（血小板生成素）、SCF（幹細胞因子）、flt-3 配體和 IL-3。最佳化的配方可讓造血祖細胞蓬勃擴張，同時維持其原始表型並禁止分化。

造血祖細胞培養基的補充細節

造血祖細胞培養基包含祖細胞健康擴張所需的所有生長因子和補充劑。 可用的補充劑包括可選的細胞因子混合物 E（產品編號 C-39890，1 mL 或 C-39891，5 mL），含有重組人 TPO、SCF、flt-3 配體和 IL-3。不過，使用者也可以補充其他生長因子來自訂培養基。造血幹細胞培養基不含有抗生素或抗霉菌劑，適用於 5%CO₂氣氛的培養箱中。

輔助培養基的使用準備

• 將SupplementMix在15-25 °C解凍。
• 將每種補充劑的全部內容物轉移到基礎培養基。
• 關閉瓶子並輕輕攪拌，直到獲得均勻的混合物。

重要注意事項： 對於造血祖細胞 (HPC) 擴展培養基 DXF，還需在 15-25 °C 下解凍 Cytokine Mix E。  小心地上下移掃，無菌混合溶液。  將全部內容物轉移到相應數量的完整 Medium 中。  關閉瓶子並輕輕攪拌，直到達到均勻的混合物。

造血細胞培養基和補充物的儲存和穩定性

• 基礎培養基一經到達，立即儲存於4-8 °C的黑暗處；不要冷凍基礎培養基。
• 如果按照指示儲存，產品在所述有效期限前是穩定的。
• 一旦將補充劑添加到基礎培養基，完整培養基在 4-8 °C下的保質期為六周。添加了 Cytokine Mix E 的培養基應在添加細胞因子後 2 週內使用。請勿冷凍完整培養基。
• 使用時，只需預熱一次等分的完整培養基，並將剩餘的培養基冷藏於 4-8 °C。
• 交付後，冷凍保存的細胞應立即播種，否則應儲存在液氮中。

人 CD34⁺ ；Progenitor Cell Cultivation

Protocol for Cryopreserved Hematopoietic Cells

重要注意事項：

• 冷凍保存的細胞到達後，儲存於液氮中，或立即播種。在 -80 °C 下儲存不足以保存細胞，並會造成不可逆的細胞損傷。
• 使用無菌技術和層流生物安全櫃處理細胞。
   

1. 準備培養基
   根據建議的接種密度（見下表），在無菌細胞培養容器中轉移所需容量的 PromoCell 培養基。每瓶細胞至少使用 9 mL 培養基。
   
   
2. 解凍細胞
   從液氮容器中取出冷凍瓶，立即放在乾冰上 - 即使是短暫的運輸。在層流工作台下，將瓶盖輕輕扭轉四分之一圈以釋放壓力，然後重新鎖緊。將小瓶浸入水浴或熱水浴 (37 °C) 2 分鐘，直到旋緊瓶蓋。
   
   
3. 消毒小瓶並為細胞播種
   在層流台下用 70% 的乙醇徹底沖洗冷凍瓶。然後，從螺旋蓋的螺紋部位吸出多餘的乙醇。打開小瓶，將細胞轉移到含有步驟 1 預先溫過的培養基的細胞培養容器中。
   
   
4. 培養細胞
   將容器放入培養箱（37 °C，5% CO₂）中進行細胞附著。4-8小時後按照亞培養方案（見下文）更換培養液。 

造血祖細胞亞培養方案

1. 收穫細胞
   收穫細胞懸液並確定細胞數量。 小心吸出細胞懸浮液，並將其轉移至離心管中。
   
   
2. 重悬并重新接种细胞
   弃去上清液，加入 1 mL 适当的 PromoCell® 细胞生长培养基，上下轻轻移液重悬细胞。按照建議的接種密度將細胞接種於新的細胞培養容器中，容器中盛有預溫至 37 °C的新鮮細胞生長液。將培養容器置於孵育箱中（37 °C，5% CO₂）。

人類造血幹細胞培養系統品質控制

Human CD34⁺ ；Progenitor Cells 品質控制

每批人類 CD34⁺ Progenitor Cells 都會進行嚴格的品質控制測試。

• 透過流式細胞儀分析活力、細胞大小和重要標記（如 CD34）的存在。
• 檢測是否不含 HIV-1、HIV-2、HBV、HCV、HTLV-1、HTLV-2 和微生物污染物（真菌、細菌和支原體）。
• 每個批次的詳細分析證書 (CoA) 可供下載。

人 CD34+ 祖細胞規格

。

Product	Recommended Culture Media	Recommended Differentiation Media	Plating Density
Human CD34+ Progenitor Cells from Cord Blood (hCD34+-CB), single donor	Product No.C-28021 產品編號 C-39891	每平方厘米 5,000 個細胞

* 適用於造血祖細胞的 CFU 分析 (LTC-IC 分析)。

造血祖細胞培養基的品質控制

所有批次的造血祖細胞培養基都經過使用原代人類單核細胞和來自臍帶血的純化造血祖細胞的嚴格品質控制測試。每個批次的 HPC Expansion Medium DXF 都經過測試，以確保能支援原始表型的造血祖細胞擴增。每個批次的造血祖細胞培養基都經過測試，以確定其是否能誘導來自臍帶血的純化 CD34⁺ 祖細胞定向分化為造血系。此外，所有批次的培養基都通過了無微生物污染物（真菌、細菌、支原體）測試。

造血祖细胞和培养基系统的预期用途

这些产品仅供 体外 使用，不得用于诊断或治疗程序。有關安全預防措施，請參閱適當的 MSDS。

造血祖細胞培養材料

這些產品僅供 體外 使用，不可用於診斷或治療程序。

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