HybridSPE-Phospholipid 技術

HybridSPE-PL如何運作？

HybridSPE-PL技術是一種簡單而通用的樣品前處理平台，專為在LC-MS或LC-MS-MS分析前去除生物血漿和血清中的內源蛋白質和磷脂干擾而設計。生物血漿或血清首先進行蛋白質沉澱，將生物血漿/血清加入 96 孔板，然後再加入酸化乙腈（沉澱劑）。在抽真空之前，上部的 PTFE 熔塊會阻礙樣品過早流動。經過簡短的混合/渦旋步驟以促進蛋白質 ppt 後，在 96 孔板上抽真空。96 孔版包含一系列低孔隙率的疏水過濾器/濾網。填料床過濾器/篩板組件可作為深度過濾器，有助於在萃取過程中同時去除磷脂和沉澱的蛋白質。蛋白質沉澱樣品通過 HybridSPE-PL 裝置後，產生的洗提液可立即進行 LC-MS 或 LC-MS-MS 分析；建議方法請參閱圖 1。

圖 1. 使用 HybridSPE-PL 96 孔格式的「孔內」沉澱程序

注意： 1 mL HybridSPE-PL 試劑盒版本不包含去除沉澱蛋白質所需的過濾器。因此，蛋白質沉澱必須在筒外進行，然後在HybridSPE處理前進行離心或過濾步驟。所產生的上清液/濾液會被載入 HybridSPE-PL 濾芯以去除磷脂。

如何去除磷脂？

一旦血漿/血清樣品通過添加乙腈（含 1%甲酸）進行蛋白質沉澱，它就會通過 HybridSPE-PL 填料床。填料床由專利的氧化鋯塗層矽膠顆粒組成。氧化鋯位點具有路易斯酸（電子受體）特性，可與路易斯碱（電子供體）產生強烈互動。磷脂在結構上是由一個極性頭部基團 (膦酸茲維他基) 和一個大的疏水尾部 (兩個疏水的脂肪酰基) 組成。所有磷脂固有的磷酸基都是非常強的路易斯基，會與顆粒表面官能化的氧化鋯原子產生強烈的互動（圖 2）。甲酸是沉澱劑中使用的一種關鍵改性劑，可提高許多相關分析物（如酸性化合物）的回收率。它在防止分析物保留而不影響磷脂保留/去除方面起著關鍵作用。

圖 2. HybridSPE-PT 96 孔示意圖與磷脂保留機制

縮寫詞彙：

• I.S.- 內標
  
• LLE - 液體萃取
  
• LLOQ - 定量下限
  
• PPT - 沉淀
  
• SPE - 固相萃取

商标：

Ascentis, CHIROBIOTIC, HybridSPE - Sigma-Aldrich Biotechnology LP; Fused-Core - Advanced Materials Technologies, Inc.