通过UV/VIS光谱法的磷脂氧化测定 - Avanti^® Polar Lipids 出版物：

定义

磷脂的氧化百分比可以通过比尔定律根据 234 nm 处的吸光度计算过氧化磷脂的浓度来确定。

适用范围

适用于所有不饱和磷脂。

仪器

• 紫外/可见光分光光度计
• HELLMA UV 石英样品比色管 (QS 1.000)
• Kimwipes无尘纸
• 一次性玻璃管

试剂

• 乙醇 (200 proof, 脱水 USP)
• 去离子水
• 16:0 PC（DPPC）

操作流程

1. DPPC 样品的制备。制备至少 3 mL 的 1mg/mL DPPC 溶液，溶剂为乙醇/去离子水 (9:1)。
2. 样品的制备。制备至少 3 mL 的 1mg/mL 磷脂样品 溶液，溶剂为乙醇/去离子水 (9:1)。
3. 运行空白样。空白样（背景）为用于溶解磷脂样品的溶剂。
   • 用溶剂润洗样品比色管三次，清除样品比色管中残留的污染物。
   • 将参考样注入样品比色管3/4处。
   • 使用Kimwipe无尘纸擦除样品比色管表面指纹和污染物。
   • 将样品比色管插入分光光度计，并运行空白样光谱。
4. DPPC 样品的运行。
   • 将样品比色管中的空白溶剂倒出。
   • 将DPPC样品注入样品比色管3/4处。
   • 擦除样品比色管表面指纹。
   • 将样品比色管插入分光光度计，并运行DPPC样光谱。
5. 样品的运行。
   • 将样品比色管中的DPPC样品倒出。
   • 用溶剂润洗样品比色管三次，清除样品比色管中残留的DPPC。
   • 将磷脂样品注入样品比色管3/4处。
   • 擦除样品比色管表面指纹。将样品比色管插入分光光度计，并运行样品光谱。
   • 从样品光谱中扣除DPPC光谱，并记录磷脂样品在234nm处的吸光度读数（OD）。

计算

过氧化脂质浓度 (D) = A/(B*C)
A = 在 234 nm处的吸光度读数 (OD)
B = 消光系数 (OD*mL)/(mmol*cm) (过氧化脂质的消光系数为27,000 )
C = 路径长度 cm 氧化百分比 = D/E * 100
D = 过氧化脂质的浓度 mg/mL
E = 脂质样品浓度 = 1.0 mg/mL

参考文献

1. Kim R, LaBella F. 1987. Comparison of analytical methods for monitoring autoxidation profiles of authentic lipids. J. Lipid Res. 28:1110-1117.